Improvement of ecdysone receptor gene switch for applications in plants: Locusta migratoria retinoid X receptor (LmRXR) mutagenesis and optimization of translation start site

Improvement of Ecdysone Receptor Gene Switch for Applications in Plants: Locusta Migratoria Retinoid X Receptor (LmRXR) Mutagenesis and Optimization of Translation Start Site

Tác giả: Ajay K. Singh, Venkata S. Tavva, Glenn B. Collins, Subba R. Palli

Lĩnh vực: Entomology, University of Kentucky; Plant and Soil Sciences Department, University of Kentucky

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc cải thiện hệ thống công tắc gen dựa trên thụ thể ecdysone (EcR) cho các ứng dụng trong thực vật. Các tác giả đã phát triển một công tắc gen hai lai sử dụng protein lai CH9 làm đối tác cho thụ thể ecdysone của Choristoneura fumiferana (CfEcR). Tuy nhiên, do CH9 chứa một vùng của thụ thể retinoid X của người (HsRXR), nên có thể gặp phải vấn đề về sự chấp nhận của công chúng đối với việc sử dụng trong cây trồng biến đổi gen. Do đó, nghiên cứu này nhằm mục đích xác định một dạng đột biến của thụ thể retinoid X của Locusta migratoria (LmRXR) có thể thay thế CH9. Kết quả cho thấy một đột biến ba, A62S:T81H:V123I (SHILmRXR), có hiệu suất tương đương với CH9. Hơn nữa, hiệu suất của công tắc gen EcR đã được cải thiện bằng cách tối ưu hóa vị trí khởi đầu dịch mã (trình tự Kozak AACAATGG). Công tắc gen EcR kết hợp SHILmRXR và vị trí khởi đầu dịch mã đã sửa đổi cho thấy hoạt động nền rất thấp khi vắng mặt ligand và hoạt động cảm ứng cao khi có mặt ligand trong các tế bào protoplast thuốc lá và cây biến đổi gen Arabidopsis thaliana.

Mục lục chi tiết:

• Abstract
• Introduction
• Keywords
• Correspondence
• Results: Transient expression studies with tobacco protoplasts, RXR mutagenesis, Optimization of translational start site, Comparison of performance of CfEcR:SHILmRXR, CfEcR:CH9 and CfEcR:LmRXR gene switches in tobacco protoplasts
• Figures
• Discussion
• Experimental procedures: Ligand, LmRXR mutants, Screening of LmRXR mutants in tobacco protoplasts, Dose-response and time course studies in tobacco protoplasts, Optimization of translational start site using Kozak sequences, Binary vectors for stable transformation of Arabidopsis, Production of transgenic plants, Dose-response studies in T2 Arabidopsis plants, Time course studies in soil-grown plants
• Acknowledgements
• References