Mouse cytosolic sulfotransferase SULT2B1b interacts with cytoskeletal proteins via a proline/serine-rich C-terminus

Mouse Cytosolic Sulfotransferase SULT2B1b Interacts with Cytoskeletal Proteins via a Proline/Serine-Rich C-Terminus

Tác giả: Katsuhisa Kurogi, Yoichi Sakakibara, Yosuke Kamemoto, Saki Takahashi, Shin Yasuda, Ming-Cheh Liu, Masahito Suiko

Lĩnh vực: Biochemistry and Applied Biosciences, Bioscience, Pharmacology

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào vai trò của vùng C-terminal giàu proline/serine của chuột SULT2B1b, một enzyme sulfotransferase cholesterol. Dù vùng C-terminal này không ảnh hưởng đến hoạt tính xúc tác của enzyme, các thử nghiệm pulldown với glutathione S-transferase (GST) đã chỉ ra rằng nó tương tác với các protein cytoskeleton, bao gồm actin, alpha-actinin, và myosin. Các protein chaperone như HSP90 và HSC70 cũng được xác định có liên kết. Các thí nghiệm cosedimentation đã cung cấp bằng chứng bổ sung cho sự liên kết của SULT2B1b với cytoskeleton. Kết quả cho thấy vùng C-terminal giàu proline/serine mở rộng của SULT2B1b rất quan trọng đối với tương tác với các protein cytoskeleton, cho phép enzyme di chuyển dọc theo các vi sợi actin và xúc tác quá trình sulfat hóa các hydroxysteroid tại các vị trí tế bào chất cụ thể.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• The extended C-terminus is not involved in catalytic reaction of mSULT2B1b
• mSULT2B1b interacts with cytoskeletal proteins through its proline/serine-rich C-terminal tail
• mSULT2B1b is associated with the cytoskeleton through its proline/serine-rich C-terminal tail
• Concluding remarks
• Experimental procedures
• Materials
• Preparation of vector constructs harboring full-length or truncated mSULT2B1
• Stable expression of mSULT2B1b in NIH/3T3 cells
• Bacterial expression and purification of the recombinant mouse SULTS
• Enzymatic assay
• GST pulldown assay and protein identification by PMF analysis
• Cosedimentation analysis with CSB and immunoblot analysis
• Acknowledgements
• References