Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 13 trang
Dung lượng: 186 KB

Giới thiệu nội dung

The Variable C-terminal Extension of G-protein-coupled Receptor Kinase 6 Constitutes an Accessorial Autoregulatory Domain

Tác giả: Petra Vatter, Claudia Stoesser, Ines Samel, Peter Gierschik and Barbara Moepps

Lĩnh vực: Pharmacology and Toxicology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của các biến thể C-terminal của thụ thể kinase 6 bắt cặp với G protein (GRK6) trong việc điều chỉnh hoạt động của enzyme. Bằng cách biểu hiện và phân tích bốn dạng khác nhau của GRK6 chuột (mGRK6-A đến mGRK6-D) được tạo ra từ quá trình nối RNA thay thế, các nhà nghiên cứu đã xác định rằng các dạng mGRK6-A, -B và -C có miền xúc tác hoàn chỉnh và liên kết với màng tế bào, trong khi mGRK6-D không hoạt động về mặt xúc tác và nằm trong nhân tế bào. Các biến thể mGRK6-A và -B, với các phần C-terminal kéo dài, cho thấy hoạt tính phosphoryl hóa thấp hơn so với mGRK6-C ngắn hơn. Điều này gợi ý rằng các phần C-terminal kéo dài này có thể đóng vai trò là một miền tự điều chỉnh phụ trợ, có thể bị ảnh hưởng bởi các sửa đổi như palmitoyl hóa hoặc phosphoryl hóa protein.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Keywords
  • Correspondence
  • Abbreviations
  • Results
  • Production of polyclonal antisera against mouse GRK6 variants
  • Subcellular localization of the mouse GRK6 variants in transfected COS-7 cells
  • Interaction of mGRK6-C with phospholipids
  • Functional properties of the mouse GRK6 isoforms
  • Structure-activity relationships of the C-terminus of mGRK6
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Construction of wild-type and mutant GRK6 cDNAs
  • Production of recombinant baculoviruses
  • Production of recombinant mGRK6 proteins in baculovirus-infected insect cells
  • Purification of recombinant mGRK6-C
  • Expression of recombinant mGRK6 proteins in COS-7 cells
  • Immunocytochemistry and confocal microscopy of transfected COS-7 cells
  • Interaction of recombinant mGRK6-C with phospholipid vesicles
  • Phosphorylation of light-activated rhodopsin
  • Miscellaneous
  • Acknowledgements
  • References