Selenodiglutathione uptake by the Saccharomyces cerevisiae vacuolar ATP-binding cassette transporter Ycf1p

Selenodiglutathione Uptake by the Saccharomyces Cerevisiae Vacuolar ATP-binding Cassette Transporter Ycf1p

Tác giả: Myriam Lazard, Nguyet-Thanh Ha-Duong, Stéphanie Mounié, Romary Perrin, Pierre Plateau and Sylvain Blanquet

Lĩnh vực: Biochemistry

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này khám phá vai trò của Ycf1p, một protein vận chuyển màng thuộc nhóm ATP-binding cassette (ABC) ở nấm men Saccharomyces cerevisiae, trong việc vận chuyển selenodiglutathione (GSSeSG) và glutathione disulfide (GSSG). Trước đây, Ycf1p được biết đến với khả năng vận chuyển các kim loại nặng và các hợp chất liên hợp với glutathione. Tuy nhiên, đối với độc tính của selenite, Ycf1p lại thể hiện vai trò hai mặt. Việc mất chức năng Ycf1p (khiYCF1 bị bất hoạt) dường như làm tăng sức đề kháng của tế bào đối với selenite, trong khi việc biểu hiện quá mức Ycf1p lại làm tăng độc tính của selenite.

Nghiên cứu này sử dụng các túi tiết (secretory vesicles) được phân lập từ chủng đột biến sec6-4 của S. cerevisiae để xác nhận rằng GSSeSG là một cơ chất có ái lực cao đối với Ycf1p, với tham số động học Km tương đương với các hợp chất liên hợp glutathione khác. Đồng thời, GSSG cũng được chứng minh là một cơ chất có ái lực cao của Ycf1p. Việc Ycf1p vận chuyển GSSeSG và GSSG vào không bào đã làm thay đổi tỷ lệ GSH/GSSG trong tế bào, dẫn đến sự gia tăng độc tính của selenite. Các phát hiện này cho thấy vai trò phức tạp của Ycf1p trong quá trình chuyển hóa selenite và độc tính liên quan.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• *Present address
• Introduction
• Abbreviations
• Results
• Overexpression of YCF1 confers mercury resistance and selenite sensitivity to yeast cells
• ATP-dependent uptake of GSH in secretory vesicles
• Ycf1p mediates transport of selenodiglutathione
• Ycf1p mediates transport of glutathione disulphide
• Expression of Ycf1p alters the GSH/GSSG ratio under selenite stress conditions
• Discussion
• Materials and methods
• Materials
• Strains, media and plasmid constructions
• Plate resistance assays
• Preparation of substrates
• Transport in secretory vesicles
• Acknowledgements
• References