Báo cáo khoa học: Inhibitors of protein phosphatase 1 and 2A decrease the level of tubulin carboxypeptidase activity associated with microtubules

Inhibitors of protein phosphatase 1 and 2A decrease the level of tubulin carboxypeptidase activity associated with microtubules

Tác giả: María A. Contín, Silvia A. Purro, C. Gastón Bisig, Héctor S. Barra and Carlos A. Arce

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học tế bào

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này khám phá mối liên hệ giữa hoạt tính của tubulin carboxypeptidase và sự gắn kết với vi ống, cũng như vai trò của các enzyme phosphatase trong quá trình này. Các thí nghiệm chỉ ra rằng các chất ức chế protein phosphatase 1 và 2A, như okadaic acid, làm giảm đáng kể hoạt tính của tubulin carboxypeptidase gắn với vi ống. Điều này dẫn đến sự phân ly của enzyme khỏi vi ống và chuyển vào phần hòa tan. Sự thay đổi này dường như phụ thuộc vào trạng thái động của vi ống, vì việc ổn định vi ống bằng taxol có thể ngăn chặn sự phân ly này. Kết quả cho thấy rằng quá trình phosphoryl hóa/dephosphoryl hóa của tubulin carboxypeptidase, hoặc một hợp chất trung gian, có thể đóng vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh sự gắn kết của enzyme với vi ống và do đó ảnh hưởng đến trạng thái tyrosin hóa của vi ống.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Chemicals
• Antibodies
• Cell culture
• Isolation of cytoskeletal fraction
• Isolation of microtubular and soluble tubulin fractions from living cells under microtubule-stabilizing conditions
• Measurement of tubulin carboxypeptidase activity
• Immunoblotting
• Quantification of Glu-tubulin
• Immunofluorescence
• Treatment of cells with effectors
• Results
• Exposure of cells to okadaic acid induces decrease in the activity of tubulin carboxypeptidase associated with microtubules in living cells
• Exposure of cells to OA induces redistribution of tubulin carboxypeptidase activity between the microtubule-associated and nonassociated states
• Type of phosphatase(s) involved in regulation of the carboxypeptidase activity associated with microtubules
• In vitro effect of OA on tubulin carboxypeptidase activity associated with microtubules
• Effect of stabilization of microtubules previous or subsequent to OA treatment of tubulin carboxypeptidase dynamics in the mechanism by which the OA treatment of the cells results in a low activity of carboxypeptidase associated with microtubules
• Is association of tubulin carboxypeptidase with microtubules necessary to catalyse detyrosination?
• Discussion
• The amount of tubulin carboxypeptidase activity associated with microtubules is regulated by phosphorylation/dephosphorylation events in living cells
• Phosphorylation/dephosphorylation of tubulin carboxypeptidase (or an intermediary compound) is dependent on disassembly of microtubules
• Acknowledgements
• References