Báo cáo khóa học: A specific C-terminal deletion in tropomyosin results in a stronger head-to-tail interaction and increased polymerization

A SPECIFIC C-TERMINAL DELETION IN TROPOMYOSIN RESULTS IN A STRONGER HEAD-TO-TAIL INTERACTION AND INCREASED POLYMERIZATION

Tác giả: Adriana A. Paulucci, Angela M. Katsuyama, Aurea D. Sousa, Chuck S. Farah

Lĩnh vực: Bioquímica

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá sự thay đổi trong tương tác đầu-cuối và khả năng polymer hóa của tropomyosin (Tm) khi loại bỏ một phần C-terminus. Một đoạn tropomyosin tái tổ hợp, ASTm(1–260), thiếu 24 axit amin cuối cùng, cho thấy khả năng polymer hóa cao hơn đáng kể so với protein dạng đầy đủ, dù không có C-terminus. Điều này cho thấy C-terminus mới được tạo ra sau khi loại bỏ có thể polymer hóa tương tự protein nguyên vẹn. Các thí nghiệm CD và huỳnh quang chỉ ra rằng các đoạn N-terminus và C-terminus có thể tương tác, dẫn đến sự gấp nếp đáng kể của đoạn C-terminus.

Mục lục chi tiết:

• A specific C-terminal deletion in tropomyosin results in a stronger head-to-tail interaction and increased polymerization
• Keywords: tropomyosin; head-to-tail interaction; protein polymerization; protein folding; circular dichroism.
• Correspondence to C. S. Farah
• Abbreviations: ASTm, alanine-serine fusion in recombinant tropomyosin; Tm, tropomyosin.
• Materials and methods
• Construction of vectors for expression of Tm mutants
• Protein expression and purification
• Fluorescence experiments
• Viscosity experiments
• CD spectroscopy
• Results
• Thermal denaturation of Tm fragment mixtures monitored by CD spectra
• Fig. 1. Viscosity assays of recombinant tropomyosin (Tm) and its fragments as a function of ionic strength.
• Fig. 2. Titration of nfTm269(5OHW) with ASTm(1-142) or nfTm(1-142), as monitored by fluorescence.
• Fig. 3. Far UV CD spectra of N- and C-terminal fragments of tropomyosin (Tm) and their mixtures.
• Table 1. The a-helix content of tropomyosin (Tm) fragments used in this study, as a function of temperature and ionic strength.
• Fig. 4. Thermal denaturation curves of individual tropomyosin (Tm) fragments and of N- and C-terminal fragment mixtures.
• Fig. 5. Model for folding and interaction of tropomyosin (Tm) N- and C-terminal domains in the head-to-tail complex.
• Discussion
• Table 2. Alignment of the C-terminus of ASTm(1-260) with the C-termini of tropomyosin (Tm) muscle isoforms known to partake in head-to-tail interactions.
• Acknowledgements
• References