Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 10 trang
Dung lượng: 221 KB

Giới thiệu nội dung

Identification of sites of phosphorylation by G-protein-coupled receptor kinase 2 in β-tubulin

Tác giả: Norihiro Yoshida, Kazuko Haga, and Tatsuya Haga

Lĩnh vực: Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này xác định các vị trí phosphoryl hóa trên β-tubulin do G-protein-coupled receptor kinase 2 (GRK2) xúc tác. GRK2 là một enzyme kinase được biết đến với vai trò phosphoryl hóa các thụ thể G-protein-coupled (GPCRs) đã được hoạt hóa. Các nhà nghiên cứu đã xác định các vị trí phosphoryl hóa cụ thể trên β-tubulin là Thr409 và Ser420, và cũng chỉ ra rằng Ser444 trên βIII-tubulin cũng có thể bị phosphoryl hóa bởi GRK2. Các vị trí này nằm ở vùng C-terminal của β-tubulin, trên bề mặt ngoài của vi ống. Kết quả cho thấy tubulin có thể là một cơ chất của GRK2, và quá trình phosphoryl hóa này có thể ảnh hưởng đến tương tác của vi ống với các protein liên quan đến vi ống.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
    • Vật liệu
    • Biểu hiện và tinh sạch protein
    • Phosphoryl hóa tubulin
    • Tương tác và phát hiện GRK2
    • Tiêu hóa tubulin
    • Phân tích phosphoamino acid bằng TLC
    • Nhân bản β-tubulin và đột biến các vị trí phosphoryl hóa
    • Phosphoryl hóa tubulin đã xử lý bằng phosphatase
  • Kết quả
    • GRK2 liên kết đặc hiệu với β-tubulin
    • Tiêu hóa một phần tubulin đã phosphoryl hóa
    • Phân tích peptide được đánh dấu phóng xạ và phân tích phosphoamino acid
    • Phosphoryl hóa các protein dung hợp GST của β₁-tubulin, βIII-tubulin và các peptide C-terminal của β₁-tubulin biểu hiện trong E. coli
    • Phosphoryl hóa các protein dung hợp GST của các đột biến β-tubulin
    • Phosphoryl hóa tubulin đã xử lý bằng phosphatase
  • Bàn luận
  • Tài liệu tham khảo