Báo cáo khoa học: Molecular characterization of H2O2-forming NADH oxidases from Archaeoglobus fulgidus

Molecular Characterization of H₂O₂-Forming NADH Oxidases from Archaeoglobus Fulgidus

Tác giả: Servé W. M. Kengen, John van der Oost, and Willem M. de Vos

Lĩnh vực: Lĩnh vực Vi sinh vật học, Khoa học Nông nghiệp và Thực phẩm.

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc mô tả phân tử của các enzyme NADH oxidase tạo ra H₂O₂ từ vi khuẩn Archaeoglobus fulgidus. Ba gen mã hóa cho các enzyme này, bao gồm noxA-1, noxB-1 và noxC, đã được phân lập và biểu hiện trong Escherichia coli. Các sản phẩm gen đã được tinh chế và đặc tính hóa. NoxA-1 và NoxB-1, là các enzyme chứa FAD, đã cho thấy hoạt tính NADH oxidase với các giá trị Km khác nhau đối với NADH và oxy. Điều đáng chú ý là cả hai enzyme đều chủ yếu tạo ra H₂O₂ thay vì H₂O, khác với các protein tương đồng ở môi trường nhiệt độ trung bình. Nghiên cứu cũng khám phá các khía cạnh xúc tác và độ bền nhiệt của các enzyme này, cũng như thảo luận về vai trò sinh lý tiềm năng của chúng trong Archaeoglobus fulgidus, một sinh vật ưa nhiệt kỵ khí.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Cloning and expression of the NADH oxidase genes
• Expression of the NADH oxidase genes in E. coli
• Purification of the recombinant enzymes
• SDS/PAGE of extracts of recombinant E. coli containing NoxA-1, NoxB-1 or NoxC from A. fulgidus
• Effect of temperature on activity
• The product of the NADH oxidase reaction
• pH dependence of purified NoxA-1 (○) and NoxB-1 (●)
• Thermal stability of NoxB-1
• Specific activity (U/mg)
• Rate dependence of NoxA-1 and NoxB-1 on the NADH concentration
• Electron acceptors other than oxygen
• Discussion
• Acknowledgements
• References