Báo cáo khoa học: Site-directed mutagenesis of a loop at the active site of E1 (a2b2) of the pyruvate dehydrogenase complex A possible common sequence motif

Site-directed Mutagenesis Of A Loop At The Active Site Of E1 (α2β2) Of The Pyruvate Dehydrogenase Complex

Tác giả: Markus Fries, Hitesh J. Chauhan, Gonzalo J. Domingo, Hyo-Il Jung and Richard N. Perham

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của các axit amin bảo tồn trong vùng lặp tại vị trí hoạt động của enzyme E1 thuộc phức hợp pyruvate dehydrogenase (PDH). Thông qua phương pháp đột biến định hướng, các nhà nghiên cứu đã thay thế các axit amin cụ thể và đánh giá ảnh hưởng của những thay đổi này đến hoạt động xúc tác của enzyme. Kết quả cho thấy các axit amin này có thể liên quan đến việc liên kết chất nền 2-oxo acid, quá trình decarboxyl hóa, cơ chế “mở-đóng” của vị trí hoạt động và điều hòa hoạt động thông qua phosphoryl hóa.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Results
• Multiple sequence alignment of E1 components of 2-OADH complexes
• Choice of mutations
• Effects of mutations on catalytic activity
• Determination of kinetic parameters
• Dependence of E1 activity on temperature
• Binding of E1 to the peripheral subunit-binding domain of E2
• Discussion
• Function of the mutated amino acids
• A common sequence motif
• Acknowledgements
• References