Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 251 KB

Giới thiệu nội dung

Guanidinium Chloride- and Urea-Induced Unfolding of FprA, a Mycobacterium NADPH-Ferredoxin Reductase: Stabilization of an Apo-Protein by GdmCl

Tác giả: Nidhi Shukla, Anant Narayan Bhatt, Alessandro Aliverti, Giuliana Zanetti, Vinod Bhakuni

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá quá trình biến tính của FprA, một loại enzyme reductase NADPH-ferredoxin từ vi khuẩn lao, dưới tác động của guanidinium chloride (GdmCl) và urê. Các phương pháp quang phổ và đo hoạt tính enzyme đã được sử dụng để phân tích sự thay đổi cấu trúc và chức năng của protein. Kết quả cho thấy urê gây ra quá trình biến tính đồng hợp mà không tạo ra các chất trung gian. Ngược lại, GdmCl gây ra sự ổn định cấu trúc dạng nén và hình thành các chất trung gian, bao gồm cả apo-protein. Sự khác biệt trong cơ chế biến tính giữa urê và GdmCl được cho là do tương tác tĩnh điện.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Keywords
  • Note
  • The guanidinium chloride- and urea-induced unfolding of FprA, a mycobacterium NADPH-ferredoxin reductase, was examined in detail using multiple spectroscopic techniques, enzyme activity measurements and size exclusion chromatography.
  • The conformational stability of proteins can be measured by equilibrium unfolding studies using guanidinium chloride (GdmCl) and urea, the two agents commonly used as protein denaturants.
  • Mycobacterium tuberculosis NADPH-ferredoxin reductase (FprA) is a 50-kDa flavoprotein encoded by gene Rv3106 of the H37Rv stain of the pathogen [6].
  • Changes in molecular properties of FprA associated with GdmCl-induced unfolding
  • Results
  • Intermediates during FprA unfolding
  • Characteristics of the GdmCl-stabilized compact state of FprA
  • Characterization of the GdmCl-stabilized apo-FprA
  • Changes in molecular properties of FprA associated with urea-induced unfolding
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Methods
  • Overexpression and purification of FprA
  • GdmCl and urea denaturation of FprA
  • Enzymatic activity
  • Fluorescence spectroscopy
  • CD measurements
  • Size exclusion chromatography
  • Acknowledgements
  • References