Báo cáo khoa học: Efficient synthesis of a disulfide-containing protein through a batch cell-free system from wheat germ

Efficient Synthesis Of A Disulfide-Containing Protein Through A Batch Cell-Free System From Wheat Germ

Tác giả: Takayasu Kawasaki, Mudeppa D. Gouda, Tatsuya Sawasaki, Kazuyuki Takai, Yaeta Endo

Lĩnh vực: Công nghệ sinh học, Hóa sinh

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này trình bày một phương pháp hiệu quả để tổng hợp protein chứa liên kết disulfide trong hệ thống dịch mã tự do từ mầm lúa mì. Hệ thống này được tối ưu hóa để sản xuất protein tái tổ hợp có cấu trúc phức tạp, đặc biệt là các protein cần hình thành các cầu disulfide nội phân tử để có hoạt tính sinh học. Bằng cách điều chỉnh các điều kiện phản ứng, bao gồm loại bỏ tác nhân khử và bổ sung enzyme protein disulfide isomerase (PDI), các nhà nghiên cứu đã thành công trong việc tạo ra một protein kháng thể đơn chuỗi (scFv) có khả năng gấp nếp đúng và hoạt tính cao. Phương pháp này cũng được ứng dụng để tổng hợp scFv được gắn biotin, cho phép phát hiện kháng nguyên nhạy bén thông qua các kỹ thuật như SPR. Hệ thống tổng hợp tự do từ mầm lúa mì này mở ra tiềm năng ứng dụng rộng rãi trong nghiên cứu protein, chẩn đoán và phát triển thuốc.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Construction of plasmids
• Preparation of mRNAs
• Cell-free translation
• Affinity chromatography
• SPR analysis
• Antigen-binding analyses
• Affinity capture of the nascent polypeptide
• Functional biotinylation
• Discussion
• References