Báo cáo khoa học: Biochemical characterization of a U6 small nuclear RNA-specific terminal uridylyltransferase

Biochemical Characterization of a U6 Small Nuclear RNA-Specific Terminal Uridylyltransferase

Tác giả: Ralf Trippe, Holger Richly, Bernd-Joachim Benecke

Lĩnh vực: Biochemistry, Ruhr University Bochum, Germany

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích chi tiết hoạt động của enzyme U6-TUTase, một enzyme có khả năng biến đổi đặc hiệu đầu cuối 3′ của RNA nhỏ U6 (U6 snRNA) ở tế bào động vật có vú. Nghiên cứu khám phá các yêu cầu về ion, cơ chất và các đặc tính khác của enzyme này. Kết quả cho thấy enzyme hoạt động tối ưu trong điều kiện sức mạnh ion trung bình và sự hiện diện của MgCl2. Enzyme chỉ chấp nhận các phân tử U6 snRNA đã có sẵn ít nhất một gốc UMP ở đầu cuối 3′ và có khả năng bổ sung thêm các gốc UMP để tạo thành cấu trúc 3′ với bốn gốc UMP như quan sát thấy trong U6 snRNA của tế bào. Nghiên cứu cũng đề xuất một quy trình tinh sạch enzyme dựa trên sắc ký ái lực, xác định khối lượng phân tử biểu kiến của U6-TUTase là 115 kDa.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Protein fractionation
• Templates
• Assay of TUTase
• Electrophoretic mobility-shift assay (EMSA)
• Indirect labeling analysis
• Results
• Ionic requirements of HeLa cell TUTases
• Restoration of authentic 3′-ends by the U6 snRNA-specific TUTase
• Structural requirements for the U6 substrate RNA
• Complex formation of the U6-TUTase with substrate RNA
• Discussion
• Acknowledgements
• References