Báo cáo khoa học: Hypoxia induces expression of a GPI-anchorless splice variant of the prion protein

Tên đề tài: Hypoxia induces expression of a GPI-anchorless splice variant of the prion protein

Tác giả: Yutaka Kikuchi, Tomoshi Kakeya, Osamu Nakajima, Ayako Sakai, Kikuko Ikeda, Naoto Yamaguchi, Takeshi Yamazaki, Ken-ichi Tanamoto, Haruo Matsuda, Jun-ichi Sawada and Kosuke Takatori

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Y học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này báo cáo về việc phát hiện một dạng mRNA được nối biến thể (splice variant) trong gen PRNP của tế bào u nguyên bào sợi tầng T98G của người. Dạng nối biến thể này thiếu tín hiệu chuỗi neo GPI và mã hóa một polypeptide gồm 230 axit amin. Sản phẩm của nó, được gọi là GPI-anchorless PrP (GPI⁻ PrPSV), là dạng không glycosyl hóa, hòa tan trong chất tẩy không ion và có mặt trong phân đoạn tế bào chất. Nghiên cứu cũng phát hiện mức độ thấp của mRNA nối biến thể này trong mô não và mô ngoài thần kinh của người. Khi các tế bào T98G được nuôi cấy lâu dài trong môi trường thiếu oxy, biểu hiện mRNA nối biến thể tăng lên và biểu hiện mRNA PrP được nối thông thường giảm xuống. Điều này cho thấy rằng mức độ oxy có thể điều hòa biểu hiện của GPI⁻ PrPSV trong tế bào T98G.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả
  • Phát hiện dạng nối biến thể của mRNA PrP trong tế bào T98G
  • Biểu hiện của dạng nối biến thể PrP không có neo GPI trong tế bào T98G
  • Cảm ứng sản xuất dạng nối biến thể PrP không có neo GPI bởi tình trạng thiếu oxy
  • Phát hiện dạng nối biến thể của mRNA PrP trong não người
• Thảo luận
• Quy trình thực nghiệm
  • Vật liệu
  • Chuẩn bị kháng thể
  • Nuôi cấy tế bào
  • Chuẩn bị PrP người tái tổ hợp và dạng nối biến thể của PrP
  • Phân tích RT-PCR và giải trình tự trực tiếp
  • RT-PCR định lượng
  • Chuẩn bị dịch đồng nhất tế bào
  • Phân vùng dưới tế bào
  • Kiểm tra độ hòa tan trong chất tẩy
  • Xét nghiệm PrP kháng protease
  • Khử glycosyl hóa bằng enzyme
  • Miễn dịch hóa học
  • Trình tự nucleotide
• Tài liệu tham khảo