Báo cáo khoa học: Cdc37 maintains cellular viability in Schizosaccharomyces pombe independently of interactions with heat-shock protein 90

Cdc37 Maintains Cellular Viability in Schizosaccharomyces pombe Independently of Interactions with Heat-Shock Protein 90

Tác giả: Emma L. Turnbull, Ina V. Martin, Peter A. Fantes

Lĩnh vực: Sinh học Tế bào

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của protein Cdc37, một phân tử chaperone, trong sự sống còn của tế bào nấm men Schizosaccharomyces pombe. Dù có sự tương đồng chuỗi amino acid thấp giữa các loài, Cdc37 từ Saccharomyces cerevisiae và con người có thể thay thế cho protein Cdc37 của S. pombe trong chủng thiếu gen Cdc37 nội sinh. Quan trọng hơn, một cấu trúc chỉ bao gồm miền N-terminal của Cdc37 S. pombe, thiếu các miền gắn Hsp90 và đồng phân hóa, vẫn duy trì được khả năng sống của tế bào. Điều này cho thấy quá trình đồng phân hóa của Cdc37 và tương tác với co-chaperone Hsp90 có thể không thiết yếu cho chức năng của Cdc37 trong S. pombe. Tuy nhiên, các phân tích sinh hóa đã chỉ ra rằng một phần nhỏ Cdc37 trong tế bào liên kết với Hsp90 trong một phức hợp có khối lượng phân tử cao. Dữ liệu này nhấn mạnh rằng miền N-terminal của Cdc37 thực hiện các chức năng thiết yếu một cách độc lập với miền gắn Hsp90 và quá trình đồng phân hóa của chính chaperone.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Human and S. cerevisiae Cdc37 are functional homologues of S. pombe Cdc37
• Affinity purified S. pombe Cdc37 antibody
• The C-terminal domain of S. pombe Cdc37 is not essential for in vivo function
• Overexpression of the N-terminal domain of Cdc37 is sufficient for cellular viability
• A five amino acid in-frame insertion within the middle domain of S. pombe Cdc37 abolishes function
• A small fraction of Cdc37 occurs in a high molecular mass complex
• Cdc37 and Hsp90 interact in high molecular mass complexes
• S. pombe Cdc37 and Hsp90 interact genetically
• Discussion
• Experimental procedures
• Alignment of Cdc37 protein sequence
• Antibodies
• Cloning and expression vectors
• Random mutational analysis of S. pombe cdc37
• Site directed mutagenesis of S. pombe cdc37 to generate truncation mutants
• Yeast strains
• Assay of mutant cdc37 genes in a cdc37 strain by plasmid shuffle in S. pombe
• Recombinant protein purification
• Size exclusion chromatography
• Immunoprecipitation
• Acknowledgements
• References