Báo cáo khoa học: Identification of critical active-site residues in angiotensin-converting enzyme-2 (ACE2) by site-directed mutagenesis

Identification of critical active-site residues in angiotensin-converting enzyme-2 (ACE2) by site-directed mutagenesis

Tác giả: Jodie L. Guy, Richard M. Jackson, Hanne A. Jensen, Nigel M. Hooper and Anthony J. Turner

Lĩnh vực: Biochemistry and Microbiology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định các dư lượng quan trọng tại vị trí hoạt động của enzyme angiotensin-converting enzyme-2 (ACE2) thông qua phương pháp đột biến định hướng. ACE2 đóng vai trò quan trọng trong bệnh tim mạch và là thụ thể cho virus SARS. Nghiên cứu so sánh ACE2 với enzyme angiotensin-converting enzyme (ACE) và làm nổi bật những khác biệt về cơ chất và chất ức chế. Thông qua các thí nghiệm đột biến, Arg273 được xác định là yếu tố then chốt cho việc gắn kết cơ chất, trong khi His345 và His505 đóng vai trò trong quá trình xúc tác. Nghiên cứu cũng làm sáng tỏ sự khác biệt về độ nhạy với ion chloride giữa ACE2 và ACE, chỉ ra rằng ACE2 chỉ có một vị trí gắn kết chloride (CL1) duy nhất.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results and Discussion
• Binding of the C-terminus of peptide substrates by ACE2
• Role of His505 and His345 in catalysis
• Comparing the chloride-binding sites of tACE and ACE2
• Conclusion
• Experimental procedures
• Materials
• Site-directed mutagenesis
• Expression of ACE2 in HEK293 cells
• One-step RT-PCR
• Protein determination
• PNGase F treatment
• SDS/PAGE
• Immunoelectrophoretic analysis
• ACE2/ACE activity assays
• Acknowledgements
• References