Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 238 KB

Giới thiệu nội dung

Green fluorescent protein-tagging reduces the nucleocytoplasmic shuttling specifically of unphosphorylated STAT1

Tác giả: Thomas Meyer, Andreas Begitt, Uwe Vinkemeier

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Tín hiệu tế bào

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này xem xét ảnh hưởng của việc gắn thẻ protein huỳnh quang xanh (GFP) lên quá trình vận chuyển nucleocytoplasmic của STAT1, một yếu tố phiên mã quan trọng trong phản ứng với cytokine. Các thí nghiệm sử dụng kỹ thuật FRAP và các phương pháp khác cho thấy rằng việc gắn thẻ GFP làm giảm đáng kể tốc độ vận chuyển nucleocytoplasmic của STAT1 không phosphoryl hóa. Điều này dẫn đến sự kéo dài thời gian tích lũy STAT1 trong nhân và làm giảm hoạt tính phiên mã của nó. Ngược lại, việc gắn thẻ GFP không ảnh hưởng đáng kể đến quá trình vận chuyển vào nhân của STAT1 đã phosphoryl hóa.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Results
  • GFP-tagging prolonged the duration of STAT1 nuclear accumulation, but not its build-up phase
  • The prolonged nuclear accumulation of GFP-tagged STAT1 was associated with reduced tyrosine phosphorylation and DNA binding
  • Protein microinjection and pharmacological export inhibition revealed that GFP-tagging impairs the nucleocytoplasmic translocation specifically of unphosphorylated STAT1
  • GFP-tagging decreases the transcriptional activity of STAT1 by reducing its nucleocytoplasmic shuttling
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Plasmids
  • Cell culture and DNA transfections
  • Purification of recombinant proteins
  • Microinjection
  • Immunocytochemistry
  • Fluorescence microscopy
  • Western blotting
  • Gelshift and reporter gene assays
  • Acknowledgements
  • References