Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: Đang cập nhật

Giới thiệu nội dung

Tyrosine-dependent basolateral targeting of human connexin43–eYFP in Madin–Darby canine kidney cells can be disrupted by the oculodentodigital dysplasia mutation L90V

Tác giả: Jana Chtchetinin, Wes D. Gifford, Sichen Li, William A. Paznekas, Ethylin Wang Jabs, Albert Lai

Lĩnh vực: Basolateral targeting of Cx43 in MDCK cells

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định cơ chế phân cực màng tế bào của connexin 43 (Cx43) tại mặt đáy (basolateral membrane) trong các tế bào thận chó Madin-Darby (MDCK). Các nhà nghiên cứu đã tạo ra các dòng tế bào MDCK ổn định biểu hiện Cx43-eYFP hoang dã (wild-type) và các dạng đột biến của nó. Kết quả cho thấy Cx43-eYFP hoang dã được định vị chọn lọc tại màng đáy. Sự thay thế tyrosine ở vị trí 286 (Y286) hoặc một đoạn trình tự chứa tín hiệu nội hóa của thụ thể transferrin đã phá vỡ sự định vị này.

Quan trọng hơn, nghiên cứu đã chứng minh rằng đột biến L90V, một đột biến liên quan đến bệnh loạn sản xương-răng-ngón tay (oculodentodigital dysplasia – ODDD), gây rối loạn sự phân cực màng đáy của Cx43-eYFP. Điều này cho thấy rằng các đột biến liên quan đến ODDD có thể góp phần vào bệnh lý bằng cách làm thay đổi sự định vị phân cực của Cx43. Nghiên cứu cũng xem xét các khía cạnh khác của phân cực màng, bao gồm vai trò của tín hiệu tyrosine, ảnh hưởng của các đột biến đến sự phân hủy protein và sự hình thành các mảng liên hợp khe (gap junction plaques).

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
  • Sơ đồ mô tả chuỗi axit amin của Cx43-eYFP và vị trí các đột biến
  • Phân cực màng tế bào của Cx43 trong tế bào MDCK
  • Sự định vị phân cực của Cx43-eYFP trên màng tế bào MDCK
  • Vai trò của Y286 trong việc định vị phân cực chọn lọc
  • Đột biến L90V làm rối loạn sự định vị phân cực của Cx43-eYFP
  • Các mảng liên hợp khe chủ yếu nằm ở màng bên
  • Sự phân hủy protein màng tế bào bị suy giảm đối với Y286A Cx43-eYFP
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Nuôi cấy tế bào
  • Tạo các cấu trúc dung hợp Cx43-eYFP hoang dã và đột biến
  • Chuyển gen các cấu trúc Cx43-eYFP vào vector retroviral
  • Phân lập protein bề mặt bằng biotinylation trên các đĩa nuôi cấy mô
  • Phân lập chọn lọc protein bề mặt từ các vùng đỉnh và đáy bằng biotinylation
  • Phân lập protein toàn phần bằng biotinylation trên các đĩa nuôi cấy mô
  • Tính thấm qua màng đơn lớp MDCK
  • Đo điện trở xuyên màng
  • Phân tích western blot các protein dung hợp Cx43-eYFP
  • Kính hiển vi đồng tiêu
  • Xét nghiệm phân hủy protein bề mặt
  • Tài liệu tham khảo
  • Lời cảm ơn
  • Thông tin bổ sung