Báo cáo khóa học: Three cyclin-dependent kinases preferentially phosphorylate different parts of the C-terminal domain of the large subunit of RNA polymerase II

Three cyclin-dependent kinases preferentially phosphorylate different parts of the C-terminal domain of the large subunit of RNA polymerase II

Tác giả: Reena Pinhero, Peter Liaw, Kimberly Bertens and Krassimir Yankulov

Lĩnh vực: Molecular Biology and Genetics

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này so sánh một cách có hệ thống hoạt động của ba enzyme kinase phụ thuộc cyclin (CDK), cụ thể là CDK7/CycH/MAT1, CDK8/CycC và CDK9/CycT1, trên các cơ chất C-terminal domain (CTD) tái tổ hợp. Các kết quả cho thấy ba kinase này không khác biệt đáng kể về hoạt động đối với CTD trong ống nghiệm, nhưng chúng có khả năng khác nhau trong việc siêu phosphoryl hóa các cơ chất CTD. CDK7/CycH/MAT1 tạo ra chủ yếu các peptide CTD toàn phần và bị cắt ngắn siêu phosphoryl hóa, trong khi CDK8/CycC và CDK9/CycT1 tạo ra chủ yếu các peptide giảm phosphoryl hóa. Ngoài ra, các phần khác nhau của CTD được phosphoryl hóa khác nhau bởi ba kinase này. Các phát hiện này chỉ ra rằng ba kinase sở hữu các đặc tính sinh hóa khác nhau có thể phản ánh vai trò của chúng trong cơ thể sống.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Expression vectors
• Expression and purification of recombinant kinases
• Expression and purification of recombinant substrates
• Kinase assay
• Quantification of levels of phosphorylation
• Results
• Expression, purification and characterization of recombinant CDK7/CycH/MAT1, CDK8/CycC and CDK9/CycT1
• CDK7/CycH/MAT1 hyperphosphorylates CTD
• CDK7/CycH/MAT1, CDK8/CycC and CDK9/CycT1 have preferences towards different parts of the CTD
• Generation of the IIo form by different parts of the CTD
• Phosphorylation of GST-CTD(42-52)
• Discussion
• Acknowledgements
• References