Báo cáo khoa học: The SCO2299 gene from Streptomyces coelicolor A3(2) encodes a bifunctional enzyme consisting of an RNase H domain and an acid phosphatase domain

The SCO2299 Gene from Streptomyces Coelicolor Encodes a Bifunctional Enzyme Consisting of an RNase H Domain and an Acid Phosphatase Domain

Tác giả: Naoto Ohtani, Natsumi Saito, Masaru Tomita, Mitsuhiro Itaya, Aya Itoh

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào gen SCO2299 từ Streptomyces coelicolor A3(2), mô tả việc nó mã hóa một peptide duy nhất bao gồm hai miền chức năng: miền RNase H và miền phosphatase axit. Miền N-terminal của protein SCO2299 thể hiện sự tương đồng cao với RNase HI, trong khi miền C-terminal lại tương đồng với protein CobC, một protein liên quan đến quá trình tổng hợp cobalamin. Kết quả thực nghiệm cho thấy miền N-terminal có hoạt tính RNase H, còn miền C-terminal lại thể hiện hoạt tính phosphatase axit. Điều này chỉ ra rằng SCO2299 là một enzyme hai chức năng mới lạ trong họ RNase H loại 1. Nghiên cứu cũng đề cập đến việc S. coelicolor là sinh vật đầu tiên được ghi nhận có bộ gen chứa ba gen RNase H hoạt động. Các hoạt động của hai miền này dường như không ảnh hưởng lẫn nhau.

Mục lục chi tiết:

• Amino acid sequence
• RNase H activity of the SCO2299 proteins
• Function of the C-terminal domain
• Discussion
• APase domain
• RNase H domain
• Intermediate region between two domains
• Multiple RNase H genes in the S. coelicolor genome
• A novel style Type 1 RNase H
• Experimental procedures
• Cells, plasmids, and materials
• In vivo complementation assay for RNase H activity
• Plasmid constructions, overproductions and purifications
• Cleavage reaction of oligomeric RNA-DNA substrates
• Measurement of phosphatase activity
• Determination of a CobC activity by CE-ESI MS
• References