Báo cáo khoa học: Regulation of the muscle-specific AMP-activated protein kinase a2b2c3 complexes by AMP and implications of the mutations in the c3-subunit for the AMP dependence of the enzyme

Regulation of the muscle-specific AMP-activated protein kinase α2β2γ3 complexes by AMP and implications of the mutations in the γ3-subunit for the AMP dependence of the enzyme

Tác giả: Kerstin Lindgren, Mattias Ormestad, Mårten Persson, Sofia Martinsson, L. Thomas Svensson, Margit Mahlapuu

Lĩnh vực: Khám phá nghiên cứu, Biovitrum AB, Göteborg, Thụy Điển

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cơ chế điều hòa của phức hợp protein kinase AMP-kích hoạt (AMPK) α2β2γ3, đặc biệt tập trung vào vai trò của AMP và ảnh hưởng của các đột biến trên tiểu đơn vị γ3. AMPK là một enzyme quan trọng trong việc cảm nhận chuyển hóa năng lượng ở sinh vật nhân chuẩn, đóng vai trò chủ chốt trong quá trình trao đổi chất glucose và lipid ở cơ xương. Các nhà nghiên cứu đã biểu hiện và tinh sạch phức hợp AMPK α2β2γ3 tái tổ hợp trong vi khuẩn E. coli để nghiên cứu các thông số động học enzyme và các cơ chế điều hòa. Nghiên cứu đã đánh giá tác động của các đột biến trong miền Bateman của tiểu đơn vị γ3 đối với sự phụ thuộc vào AMP của enzyme. Kết quả cho thấy các đột biến khác nhau trên tiểu đơn vị γ3 gây ra những ảnh hưởng khác biệt đối với sự điều hòa allosteric của phức hợp α2β2γ3 bởi AMP, trong khi không tìm thấy bằng chứng cho thấy chúng đóng vai trò trong việc điều chỉnh mức độ phosphoryl hóa của α2 bởi các kinase thượng nguồn.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Tóm tắt
• Kết quả
• Thảo luận
• Quy trình thực nghiệm
• Biểu hiện và tinh sạch phức hợp AMPK α2β2γ3 tái tổ hợp trong E. coli
• Biểu hiện và tinh sạch phức hợp AMPK α2β2γ3 trong tế bào COS7
• Đột biến định hướng đích
• Phân tích Western blot
• Thử nghiệm hoạt tính kinase của bộ ba vi khuẩn và AMPK
• Tài liệu tham khảo