Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 10 trang
Dung lượng: 187 KB

Giới thiệu nội dung

Protein Engineering of Pyruvate Carboxylase

Tác giả: Shinji Sueda, Md. Nurul Islam and Hiroki Kondo

Lĩnh vực: Biochemical Engineering and Science, Kyushu Institute of Technology, Japan

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc kỹ thuật protein của pyruvate carboxylase (PC) từ Bacillus thermodenitrificans. Cụ thể, chuỗi polypeptide của PC đã được chia thành hai phần, giữa các miền biotin carboxylase (BC) và carboxyl transferase (CT). Hai protein được tạo ra, PC-(BC) và PC-(CT+BCCP), đã được đánh giá về hoạt tính xúc tác, sự kết tập và vai trò của acetyl-CoA. Kết quả cho thấy các miền riêng biệt vẫn giữ được hoạt tính, PC-(BC) tồn tại dưới dạng dimer hoặc monomer tùy thuộc vào nồng độ, trong khi PC-(CT+BCCP) chủ yếu ở dạng dimer. Nghiên cứu cũng thảo luận về cách cấu trúc tứ phân của PC được hình thành và cách acetyl-CoA điều chỉnh cấu trúc protein.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu
  • Xây dựng plasmid biểu hiện quá mức cho PC nguyên vẹn
  • Xây dựng plasmid biểu hiện quá mức cho PC-(BC) và PC-(CT+BCCP)
  • Tinh sạch protein
  • Đo hoạt tính carboxylase của pyruvate
  • Đo hoạt tính phân cắt ATP
  • Đo hoạt tính phân cắt ATP của PC-(BC)
  • Đo hoạt tính phân cắt ATP của PC-(CT+BCCP)
  • Đo hoạt tính decarboxylase oxalacetate
  • Phân tích Avidin-blot và xác định trình tự axit amin N-terminal
  • Xác định khối lượng phân tử bằng sắc ký lọc gel HPLC
  • Xác định khối lượng phân tử bằng phổ khối
  • Kết quả
  • Xây dựng và tinh sạch các protein được kỹ thuật hóa của PC
  • Đặc tính phân tử của các protein được kỹ thuật hóa của PC
  • Hoạt tính enzym của PC nguyên vẹn
  • Hoạt tính enzym của PC-(BC)
  • Hoạt tính enzym của PC-(CT+BCCP)
  • Bàn luận
  • Tài liệu tham khảo