Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 15 trang
Dung lượng: 215 KB

Giới thiệu nội dung

Biochemical Characteristics Of C-terminal Region Of Recombinant Chitinase From Bacillus Licheniformis – Implication Of Necessity For Enzyme Properties

Tác giả: Hsu-Han Chuang, Hsu-Yang Lin, Fu-Pang Lin

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá tầm quan trọng về cấu trúc và chức năng của vùng C-terminal của enzyme chitinase tái tổ hợp từ vi khuẩn Bacillus licheniformis thông qua phương pháp gây đột biến mất đoạn C-terminal. Các phân tích so sánh giữa enzyme dạng đầy đủ và các dạng bị cắt ngắn bao gồm động học, đặc tính quang phổ huỳnh quang và CD, khả năng gắn kết và thủy phân cơ chất, độ bền nhiệt và động học phân hủy nhiệt. Kết quả cho thấy việc loại bỏ các axit amin ở vùng C-terminal, bao gồm cả vùng gắn kết chitin và motif fibronectin, không gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến cấu trúc và khả năng thủy phân chitin dạng rắn. Điều này gợi ý rằng việc gắn kết và thủy phân cơ chất chitin dạng rắn của enzyme này không hoàn toàn phụ thuộc vào vùng gắn kết chitin C-terminal và motif fibronectin.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Keywords
  • Correspondence
  • Biochemical characteristics of C-terminal region of recombinant chitinase from Bacillus licheniformis
  • Results
  • Construction of BIChi1 and its truncated genes
  • Expression, purification and characterization of BIChi1, BIChi4 and BIChi4G419
  • Kinetic parameters
  • Thermostability and thermoinactivation kinetics analyses
  • Effects of truncation on binding and hydrolysis of substrates
  • Spectrometric properties
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Bacterial strains, plasmids and culture conditions
  • DNA manipulations
  • Cloning of B. licheniformis chitinase gene (BIChi1) and its C-terminally truncated mutants (BIChi4 and BIChi4G419)
  • Protein expression and purification
  • Gel electrophoresis of proteins and zymogram analysis
  • Enzyme activity assay and protein quantitation
  • Biochemical characterization of the recombinant chitinases
  • Kinetic analysis
  • Thermostability and thermoinactivation kinetics analyses
  • Chitin-binding assay
  • HPLC analysis of the chitinase catalyzed reaction products
  • Fluorescence spectroscopy
  • CD analysis
  • Acknowledgements
  • References