Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 274 KB

Giới thiệu nội dung

Functional Properties Of The Protein Disulfide Oxidoreductase From The Archaeon Pyrococcus Furiosus

Tên đề tài: Functional properties of the protein disulfide oxidoreductase from the archaeon Pyrococcus furiosus

Tác giả: Emilia Pedone, Bin Ren, Rudolf Ladenstein, Mosè Rossi, Simonetta Bartolucci

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc mô tả đặc tính chức năng của protein disulfide oxidoreductase (PfPDO) từ vi khuẩn cổ Pyrococcus furiosus, một thành viên của một họ protein mới liên quan đến protein disulfide isomerase. Protein này có hai vị trí hoạt động redox (CXXC) và khối lượng phân tử bất thường. Các thử nghiệm đã tiết lộ rằng PfPDO không chỉ có hoạt tính oxy hóa và khử mà còn có hoạt tính isomerase. Nghiên cứu cũng khám phá vai trò của hai vị trí redox trong hoạt động của enzyme và so sánh các đặc tính của nó với protein disulfide isomerase (PDI) ở sinh vật nhân chuẩn. Kết quả cho thấy PfPDO có thể là tổ tiên của PDI ở sinh vật nhân chuẩn và thuộc về một họ protein disulfide oxidoreductase mới.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Experimental Procedures
  • Materials
  • Construction of E. coli PfPDO and mutants
  • Expression and purification of recombinant PfPDO mutants
  • Analytical methods for protein characterization
  • Counting integral numbers of residues by chemical modification
  • Cross-linking with dimethyl suberimidate (DMS)
  • Assay of enzyme activities
  • Insulin reductase activity
  • Oxidation activity
  • Spectrofluorimetric analysis
  • Detection of ATP binding by CD
  • Cross-linking of PfPDO with 8-Azido-[32P]ATP[P]
  • Fluorescence measurements
  • Assay of ATPase activity
  • Results
  • Production of wild-type and mutant PfPDO
  • Characterization of the activities of wild-type and mutant PfPDO
  • Characterization of wild-type PfPDO
  • Discussion