Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 221 KB

Giới thiệu nội dung

Expression Of Two [Fe]-Hydrogenases In Chlamydomonas Reinhardtii Under Anaerobic Conditions

Tác giả: Marc Forestier, Paul King, Liping Zhang, Matthew Posewitz, Sarah Schwarzer, Thomas Happe, Maria L. Ghirardi, Michael Seibert

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Vi sinh vật học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này báo cáo việc phân lập và đặc trưng một gen [Fe]-hydrogenase thứ hai, HydA2, từ tảo lục Chlamydomonas reinhardtii. Gen HydA2 mã hóa một protein có 505 axit amin, có 74% tương đồng và 68% đồng nhất với HydA1 đã biết. HydA2 chứa tất cả các dư lượng và motif bảo tồn trong lõi xúc tác của họ [Fe]-hydrogenase. Cả hai bản mã HydA1 và HydA2 đều được biểu hiện sau khi cảm ứng bằng điều kiện kỵ khí, có thể đạt được bằng cách sục khí trơ hoặc thiếu lưu huỳnh. Mức độ biểu hiện của cả hai bản mã được điều chỉnh bởi các điều kiện ủ, chẳng hạn như thời gian kỵ khí, bổ sung oxy, sự hiện diện của axetat hoặc sự thiếu hụt dinh dưỡng như sulfat trong quá trình nuôi cấy. Các kháng thể đặc hiệu cho HydA2 đã nhận diện một protein khoảng 49 kDa trong các dịch chiết từ tế bào C. reinhardtii được cảm ứng bằng điều kiện kỵ khí, cho thấy HydA2 được biểu hiện. Mô hình hóa cấu trúc 3D dựa trên sự tương đồng của HydA2 cho thấy vị trí xúc tác của nó tương tự như cấu trúc đã biết của Clostridium pasteurianum CpI. Nghiên cứu này là nghiên cứu hệ thống đầu tiên về biểu hiện của hai [Fe]-hydrogenase ở tảo trong cùng một sinh vật.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
  • Nuôi cấy tế bào và cảm ứng kỵ khí
  • Sàng lọc thư viện cDNA
  • Phân lập và giải trình tự gen HydA2 bộ gen
  • Phân tích Northern blot
  • Phân tích Southern blot của DNA bộ gen C. reinhardtii cho HydA1 và HydA2
  • Biểu hiện quá mức dị loại của HydA1 và HydA2
  • Tạo kháng thể và phân tích immunoblot
  • Các xét nghiệm sản xuất H2
  • Mô hình cấu trúc đồng nhất
  • Kết quả và thảo luận
  • Phân tích di truyền của HydA2
  • Biểu hiện gen trong cảm ứng kỵ khí
  • Biểu hiện gen trong điều kiện thiếu lưu huỳnh
  • Protein HydA2 được biểu hiện trong quá trình cảm ứng kỵ khí
  • Các mô hình cấu trúc của [Fe]-hydrogenase HydA2 C. reinhardtii
  • Tài liệu tham khảo