Báo cáo khoa học: Expression of the Pycnoporus cinnabarinus laccase gene in Aspergillus niger and characterization of the recombinant enzyme

Expression of the Pycnoporus cinnabarinus Laccase Gene in Aspergillus niger and Characterization of the Recombinant Enzyme

Tên đề tài: Expression of the Pycnoporus cinnabarinus laccase gene in Aspergillus niger and characterization of the recombinant enzyme

Tác giả: Eric Record, Peter J. Punt, Mohamed Chamkha, Marc Labat, Cees A. M. J. J. van den Hondel, and Marcel Asther

Lĩnh vực: Biotechnology, Molecular Biology, Enzymology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc biểu hiện gen laccase từ nấm Pycnoporus cinnabarinus trong Aspergillus niger, một vật chủ nấm được biết đến với khả năng sản xuất lượng lớn enzyme đồng loại hoặc dị loại cho các ứng dụng công nghiệp. Các nhà nghiên cứu đã sử dụng kỹ thuật tái tổ hợp để biểu hiện gen laccase, tối ưu hóa quy trình sản xuất và tinh chế enzyme tái tổ hợp. Enzyme laccase tái tổ hợp đã được đặc trưng về các đặc tính vật lý-hóa học, bao gồm khối lượng phân tử, điểm đẳng điện, hoạt tính tối ưu và độ ổn định. Kết quả cho thấy enzyme laccase tái tổ hợp có đặc tính tương tự như enzyme tự nhiên, mở ra tiềm năng ứng dụng trong các lĩnh vực công nghiệp như tẩy trắng bột giấy, xử lý hóa chất khó phân hủy và xử lý nước thải.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Strains, culture media
• Chemicals
• Expression vectors
• Aspergillus transformation and laccase production
• Screening of the laccase activity and laccase assay
• Western blot analysis and laccase immunodetection
• Northern blot analysis
• Purification of the recombinant laccase
• Characterization of the recombinant laccase
• Results
• Transformation and screening
• Study of the recombinant laccase production in A. niger
• Immunodetection of the recombinant laccase and expression of the corresponding gene in A. niger
• Purification and characterization of the recombinant laccase
• Temperature and pH stability of the laccase
• Effect of temperature and pH on laccase activity
• Kinetic properties
• Discussion
• Acknowledgements
• References