Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 16 trang
Dung lượng: Đang cập nhật

Giới thiệu nội dung

Essential Role Of The C-terminus In Melanocarpus Albomyces Laccase For Enzyme Production, Catalytic Properties And Structure

Tác giả: Martina Andberg, Nina Hakulinen, Sanna Auer, Markku Saloheimo, Anu Koivula, Juha Rövinen, Kristiina Kruus

Lĩnh vực: Enzyme học, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào vai trò của đoạn C-terminus của enzyme laccase từ nấm Melanocarpus albomyces (MaL). Đoạn C-terminus này, sau khi được xử lý trong quá trình tiết, có cấu trúc ba chiều thâm nhập vào một đường hầm dẫn đến vị trí trinuclear của enzyme. Việc thay đổi hoặc xóa bỏ đoạn C-terminus này đã gây ra những khuyết tật đáng kể trong quá trình sản xuất protein và ảnh hưởng nghiêm trọng đến hoạt tính xúc tác, độ ổn định và động học của enzyme. Cụ thể, việc xóa bỏ bốn axit amin cuối cùng đã làm cho enzyme hầu như không hoạt động, trong khi việc thay thế một axit amin duy nhất cũng làm thay đổi đáng kể các đặc tính của enzyme. Phân tích cấu trúc chi tiết của các dạng đột biến đã làm sáng tỏ cách thức mà đoạn C-terminus ảnh hưởng đến cấu trúc và chức năng của vị trí trinuclear, bao gồm cả sự hiện diện của ion clorua và liên kết hydro.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vai trò của C-terminus trong laccase của M. albomyces
  • Kết quả
  • Sản xuất và đặc tính hóa của các đột biến MaL biểu hiện ở T. reesei
  • Sản xuất và đặc tính hóa của MaL ở S. cerevisiae
  • Sản xuất và tinh chế ScMaL và các đột biến Sc(delDSGL559) và Sc(L559A) từ S. cerevisiae
  • Xác định nồng độ protein, SDS/PAGE và western blot
  • Đo hoạt tính laccase và các hằng số động học
  • Độ ổn định nhiệt và sự phụ thuộc vào pH
  • Phổ CD
  • Khử glycosyl hóa ScMaL và Sc(L559A)
  • Cấu trúc ba chiều của đột biến Sc(L559A)
  • Chuẩn hóa khối lượng, xác định trình tự N-terminal và C-terminal
  • Xác định cấu trúc của đột biến Sc(L559A)
  • Tài liệu tham khảo