Báo cáo khoa học: Combined use of selective inhibitors and fluorogenic substrates to study the specificity of somatic wild-type angiotensin-converting enzyme

Combined Use Of Selective Inhibitors And Fluorogenic Substrates To Study The Specificity Of Somatic Wild-Type Angiotensin-Converting Enzyme

Tác giả: Nicolas D. Jullien, Philippe Cuniasse, Dimitris Georgiadis, Athanasios Yiotakis and Vincent Dive

Lĩnh vực: Hóa sinh, Dược lý

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày một phương pháp tiếp cận mới để đánh giá đặc tính chọn lọc của hai vị trí hoạt động của enzyme Angiotensin-Converting Enzyme (ACE) bằng cách sử dụng kết hợp các chất ức chế chọn lọc và chất nền huỳnh quang. Phương pháp này đã làm nổi bật những khác biệt đáng kể về đặc tính chọn lọc chất nền giữa ACE soma của chuột, chuột nhắt và người. Cụ thể, một chất nền huỳnh quang đã được xác định là chọn lọc đặc biệt cho vị trí hoạt động N-domain của ACE chuột nhắt, trong khi lại thể hiện đặc tính chọn lọc C-domain rõ rệt đối với ACE chuột. Những phát hiện này cho thấy sự khác biệt trong cấu trúc vùng gắn kết của các loài ACE khác nhau và cảnh báo về việc diễn giải các nghiên cứu chức năng trên động vật dựa trên dữ liệu chọn lọc vị trí hoạt động N-domain và C-domain chỉ từ ACE người.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Abstract
• Scheme 1
• Results
• Titration of somatic ACE by RXP407 using Mca-Ala substrate
• Titration of somatic ACE by RXPA380 using Mca-Ala substrate
• Titration of somatic ACE with RXP407 and RXPA380 using Mca-BK(1-8) substrate
• Catalytic efficiencies of the ACE N-domain and C-domain in cleaving the Mca-Ala and Mca-BK(1-8) substrates
• Table 1. Kinetic parameters for the hydrolysis of the Mca-Ala substrate by rat, mouse and human somatic ACE.
• Table 2. Kinetic parameters for the hydrolysis of the Mca-BK(1-8) substrate by rat, mouse and human somatic ACE.
• Determination of RXP407 and RXPA380 Ki values for ACE species
• Table 3. Potency and selectivity of RXP407 and RXPA380 toward the N-domain and C-domain of human, mouse and rat somatic ACE.
• Inhibitor and substrate selectivity relationships with the ACE sequences
• Table 4. Residues located in the S2, S1, S1′ and S2′ subsites of ACE enzymes possibly implicated in the substrate selectivity.
• Figure 2. Detail of the human ACE N-domain active in the interaction with RXP407.
• Discussion
• Experimental procedures
• Chemicals
• Enzymes
• Enzyme assays
• Determination of kinetic parameters
• Inhibition studies
• Acknowledgements
• References