Báo cáo khoa học: Coexpression, purification and characterization of the E and S subunits of coenzyme B12 and B6 dependent Clostridium sticklandii D-ornithine aminomutase in Escherichia coli

Coexpression, Purification and Characterization of the E and S Subunits of Coenzyme B₁₂ and B₆ Dependent Clostridium sticklandii D-Ornithine Aminomutase in Escherichia coli

Tác giả: Hao-Ping Chen, Fang-Ciao Hsui, Li-Ying Lin, Chien-Tai Ren, Shih-Hsiung Wu

Lĩnh vực: Hóa sinh, Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc biểu hiện đồng thời, tinh chế và đặc tính hóa hai tiểu đơn vị E và S của enzyme D-ornithine aminomutase từ vi khuẩn Clostridium sticklandii trong hệ thống Escherichia coli. Enzyme này là một enzyme phụ thuộc vào coenzyme B₁₂ và B₆, chịu trách nhiệm cho phản ứng chuyển đổi D-ornithine thành 2,4-diaminopentanoic acid. Nghiên cứu đã thành công trong việc xây dựng một hệ thống biểu hiện hiệu quả, cho phép thu được lượng lớn protein tái tổ hợp. Các kết quả chỉ ra rằng sự tương tác giữa hai tiểu đơn vị OraS và OraE là cần thiết để enzyme duy trì cấu trúc hoạt động, ngay cả khi không có sự tham gia của coenzyme trong quá trình gấp protein in vivo. Nghiên cứu cũng đã xác định được vai trò của Lys629 trong việc liên kết với PLP và đặc tính hóa các đặc điểm của enzyme dạng hoang dã và dạng đột biến.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Vật liệu và phương pháp
• Xây dựng vector biểu hiện poraSE
• Nhiệt độ cảm ứng isopropyl thio-β-D-galactoside và biểu hiện quy mô nhỏ
• Biểu hiện protein quy mô lớn và tinh chế
• Xây dựng đột biến
• Xác định nồng độ protein và phân tích hoạt tính enzyme
• Đo lường sự gắn kết của PLP với protein
• Phổ protein nhìn thấy được bằng tia cực tím
• Kết quả
• Thảo luận
• Tài liệu tham khảo
• Lời cảm ơn