Báo cáo khoa học: Analyzing changes of chromatin-bound replication proteins occurring in response to and after release from a hypoxic block of replicon initiation in T24 cells

Analyzing changes of chromatin-bound replication proteins occurring in response to and after release from a hypoxic block of replicon initiation in T24 cells

Tên đề tài: Analyzing changes of chromatin-bound replication proteins occurring in response to and after release from a hypoxic block of replicon initiation in T24 cells

Tác giả: Maria van Betteraey-Nikoleit, Karl-Heinz Eisele, Dirk Stabenow and Hans Probst

Lĩnh vực: Physiologisch-Chemisches Institut der Universität Tübingen, Germany

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích những thay đổi của các protein liên kết với chromatin trong quá trình khởi tạo sao chép DNA, đặc biệt là khi tế bào T24 bị chặn lại do thiếu oxy (hypoxia) và sau đó được phục hồi oxy. Các nhà nghiên cứu đã phát triển một phương pháp để nghiên cứu chi tiết hơn quá trình phức tạp này trong bộ gen tế bào. Kết quả cho thấy các protein thành phần của phức hợp tiền sao chép (prereplication complex) đã hình thành ngay cả trong điều kiện thiếu oxy, sẵn sàng cho quá trình sao chép ngay khi oxy được phục hồi.

Mục lục chi tiết:

• Cell culture, transient hypoxia, reoxygenation and radioactive labeling
• Alkaline sedimentation analyses of growing daughter strands
• DNA cytofluorometry
• Mitotic index
• Separating a cell fraction containing DNA bound proteins
• Western blot analyses
• Immunofluorescence staining of total cellular and chromatin-bound PCNA
• Simultaneous staining of replicating DNA and DNA-bound PCNA
• Recruitment of proteins involved in replication to chromatin during the hypoxic period
• Discussion
• Acknowledgements
• References