Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: Đang cập nhật

Giới thiệu nội dung

A unique lipoylation system in the Archaea

Tên đề tài: A unique lipoylation system in the Archaea

Tác giả: Mareike G. Posner, Abhishek Upadhyay, Stefan Bagby, David W. Hough, Michael J. Danson

Lĩnh vực: Nghiên cứu về các phức hợp enzyme đa chức năng 2-oxoacid dehydrogenase và vai trò của lipoylation trong chuyển hóa trung tâm.

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào hệ thống lipoylation độc đáo trong Archaea, đặc biệt là ở Thermoplasma acidophilum. Lipoylation, một quá trình sửa đổi sau dịch mã, đóng vai trò thiết yếu cho hoạt động của các phức hợp enzyme đa chức năng 2-oxoacid dehydrogenase (OADHC). Trước đây, hoạt động xúc tác của OADHC chưa từng được phát hiện ở Archaea, mặc dù các gen mã hóa thành phần của phức hợp này đã được xác định. Nghiên cứu đã xác định hai protein từ Tp. acidophilum, có trình tự tương đồng đáng kể với enzyme lipoate protein ligase (LplA) ở vi khuẩn, là cần thiết cho quá trình lipoylation của thành phần dihydrolipoyl acyltransferase (E2) trong điều kiện in vitro. Các protein này tương tác với nhau để thực hiện quá trình sửa đổi sau dịch mã này. Bằng chứng ban đầu cho thấy quá trình lipoylation xảy ra trong cơ thể sống (in vivo) ở Tp. acidophilum. Phát hiện này là báo cáo đầu tiên về bộ máy lipoylation ở Archaea và cho thấy điểm độc đáo là hoạt động xúc tác phụ thuộc vào hai sản phẩm gen riêng biệt.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Đặc điểm của chuỗi gen và protein LpIA và CTD
  • Hoạt động xúc tác của LpIA và CTD
  • Phân tích tương tác protein E2lipD-LpIA-CTD
  • Kết hợp gen mã hóa LpIA và CTD
  • Lipoylation trong vivo
  • Thảo luận
  • Thủ tục thực nghiệm
  • Biểu hiện và tinh sạch các enzyme tái tổ hợp
  • Biểu hiện và tinh sạch LplA, CTD và miền lipoyl E2
  • Xây dựng plasmid
  • Biểu hiện và tinh sạch LplA, CTD và miền lipoyl E2
  • Tinh sạch LplA C-terminal domain không có tag
  • Tinh sạch miền lipoyl E2 có tag N-terminal
  • Tinh sạch dihydrolipoyl acyltransferase (E2) có tag N-terminal
  • Tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch protein dung hợp LplA-CTD
  • Đo định lượng lipoylation bằng phổ khối
  • Phân tích sự tương tác protein bằng thử nghiệm pull-down
  • Phân tích tương tác protein bằng lọc gel
  • Phân tán ánh sáng động
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo
  • Thông tin bổ sung