Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 197 KB

Giới thiệu nội dung

A New Molecular Tool for Transgenic Diatoms: Control of mRNA and Protein Biosynthesis by an Inducible Promoter-Terminator Cassette

Tác giả: Nicole Poulsen, Nils Kröger

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Công nghệ sinh học, Tảo silic

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này giới thiệu phương pháp đầu tiên cho biểu hiện gen có thể điều khiển trong tảo silic chuyển gen. Phương pháp này sử dụng một cassette DNA bao gồm các yếu tố khởi động (Pnr) và kết thúc (Tnr) từ gen reductase nitrat của tảo Cylindrotheca fusiformis. Bằng cách sử dụng protein huỳnh quang xanh lục (GFP) làm gen báo cáo, nghiên cứu đã chứng minh rằng biểu hiện gen dưới sự kiểm soát của cassette Pnr/Tnr có thể được điều chỉnh. Biểu hiện gen bị tắt khi tế bào được nuôi cấy trong môi trường có ion amoni và được bật trong vòng 4 giờ khi chuyển sang môi trường chứa nitrat. Nghiên cứu cũng cho thấy rằng việc tách biệt quá trình phiên mã và dịch mã mRNA có thể là một công cụ hữu ích để kiểm soát thời gian biểu hiện gen, cho phép sản xuất protein nhanh chóng sau khi bổ sung nitrat. Cassette Pnr/Tnr này có tiềm năng lớn cho việc thiết lập các hệ thống biểu hiện gen có thể điều khiển trong các loài tảo silic khác.

Mục lục chi tiết:

  • A new molecular tool for transgenic diatoms
  • Control of mRNA and protein biosynthesis by an inducible promoter-terminator cassette
  • Keywords
  • Correspondence
  • Notes
  • Diatoms (Bacillariophyceae) are a group of unicellular algae…
  • Abbreviations
  • Inducible promoter for transgenic diatoms
  • Results
  • Increasing the efficiency of C. fusiformis transformation
  • Cloning of the NR gene from C. fusiformis and mRNA expression studies
  • Fig. 1. Alignment of NR polypeptide sequences from diatoms.
  • Fig. 2. Influence of nitrogen source on the expression of CfNR mRNA.
  • Construction of a vector for inducible gene expression
  • Fig. 3. Structure of transformation plasmid pNICgfp and analysis of GFP expressing C. fusiformis transformants.
  • Decoupling of transcription and translation of gfp mRNA
  • Fig. 4. Influence of nitrogen source on mRNA expression and the formation of GFP protein.
  • Fig. 5. Kinetics of gfp mRNA and GFP protein expression in C. fusiformis.
  • Discussion
  • Cloning of the cffcpA-1A gene
  • Construction of vector pCfcp for constitutive gene expression
  • Construction of zeocin resistance plasmid pCfcp-ble
  • Cloning of the CfNR gene
  • Construction of the inducible expression plasmid pNICgfp
  • Diatom transformation
  • RT-PCR
  • Fluorescence measurements of GFP
  • Western blot analysis
  • Microscopy analysis
  • Acknowledgements
  • References