Báo cáo khoa học: A hydrophilic cation-binding protein of Arabidopsis thaliana, AtPCaP1, is localized to plasma membrane via N-myristoylation and interacts with calmodulin and the phosphatidylinositol phosphates PtdIns(3,4,5)P3 and PtdIns(3,5)P2

Tác giả: Nahoko Nagasaki, Rie Tomioka and Masayoshi Maeshima

Lĩnh vực: Sinh học Tế bào

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này đã xác định một protein gắn cation ưa nước mới, AtPCaP1, có mặt trên màng plasma của Arabidopsis thaliana. Protein này được neo vào màng thông qua quá trình N-myristoylation tại Gly2 và có khả năng tương tác đặc hiệu với phosphatidylinositol 3,5-bisphosphate (PtdIns(3,5)P2) và phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate (PtdIns(3,4,5)P3). Phần N-terminal của AtPCaP1 đóng vai trò thiết yếu cho cả N-myristoylation và tương tác với các phosphatidylinositol phosphates này. Ngoài ra, AtPCaP1 còn tương tác với calmodulin theo cơ chế phụ thuộc canxi, và sự tương tác này làm suy yếu khả năng gắn kết của AtPCaP1 với PtdInsPs. Những phát hiện này cho thấy AtPCaP1 có thể tham gia vào quá trình truyền tín hiệu nội bào thông qua tương tác với PtdInsPs và calmodulin.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả
• Phát hiện miễn dịch các protein orthologue của PCaP1 ở nhiều loài thực vật
• Định lượng PCaP1 trong các phân đoạn màng và hòa tan
• Chế độ và trình tự cần thiết cho sự gắn kết với màng
• Myristoylation nội bào
• Tương tác đặc hiệu của PCaP1 với PtdInsPs
• Phần N-terminal của PCaP1 là vị trí gắn kết với PtdInsPs
• Ảnh hưởng của canxi lên tương tác của PCaP1 với màng plasma và PtdInsPs
• Tương tác phụ thuộc canxi của PCaP1 với CaM
• Thảo luận
• Quy trình thực nghiệm
• Nguyên liệu thực vật
• Phân tách dưới tế bào
• Chuẩn bị PCaP1 tái tổ hợp
• Định lượng protein, SDS-PAGE và immunoblotting
• Sự phân ly của PCaP1 khỏi màng
• Phân tích sự gắn kết với màng
• Biểu hiện của PCaP1 liên kết với GFP trong tế bào Arabidopsis
• Myristoylation nội bào
• Phân tích gắn kết lipid
• Phân tích gắn kết CaM
• Tài liệu tham khảo