A Dpase Activity Of Recombinantly Expressed Thermotolerant ATPases May Be Caused By Copurification Of Adenylate Kinase Of Escherichia Coli

Copurification of NtrC1 ATPase and adenylate kinase

Tác giả: Baoyu Chen, Tatyana A. Sysoeva, Saikat Chowdhury, Liang Guo, B. Tracy Nixon

Lĩnh vực: Biochemistry and Molecular Biology

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này xem xét hoạt động ADPase biểu kiến của NtrC1 ATPase tái tổ hợp, một loại enzyme chịu nhiệt được phân lập từ vi khuẩn Aquifex aeolicus. Ban đầu, hoạt động này được cho là do NtrC1 thực hiện, nhưng thực tế lại xuất phát từ sự nhiễm một lượng nhỏ adenylate kinase (AK) từ Escherichia coli (tỷ lệ 1/10.000 so với NtrC1). AK xúc tác chuyển đổi hai phân tử ADP thành AMP và ATP, sau đó ATP được NtrC1 phân giải. Nghiên cứu này nêu bật mối quan ngại rằng việc AK có khả năng chịu nhiệt và đồng tinh chế cùng các protein chịu nhiệt có thể gây nhầm lẫn trong các nghiên cứu về enzyme phân giải nucleotide. Các phương pháp tinh chế được phát triển để tách NtrC1 ATPase khỏi AK đã bộc lộ sự không đồng nhất trong chế phẩm ATPase, dẫn đến hai phân nhóm riêng biệt. Phân nhóm tinh khiết hơn, mang một đột biến thay thế axit amin đơn lẻ, đã tạo ra các tinh thể có khả năng nhiễu xạ.

Mục lục chi tiết: