Development Of A New Method For Isolation And Long-term Culture Of Organ-specific Blood Vascular And Lymphatic Endothelial Cells Of The Mouse

Development of a new method for isolation and long-term culture of organ-specific blood vascular and lymphatic endothelial cells of the mouse

Tác giả: Takashi Yamaguchi, Taeko Ichise, Osamu Iwata, Akiko Hori, Tomomi Adachi, Masaru Nakamura, Nobuaki Yoshida and Hirotake Ichise

Lĩnh vực: Laboratory of Gene Expression and Regulation, Center for Experimental Medicine, Institute of Medical Science, University of Tokyo, Japan

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này trình bày một phương pháp mới để phân lập và nuôi cấy lâu dài các tế bào nội mô mạch máu và mạch bạch huyết đặc hiệu của cơ quan trên chuột. Các tế bào nội mô là thành phần thiết yếu của hệ thống mạch máu, đóng vai trò quan trọng trong quá trình phát triển, sức khỏe và bệnh tật. Tuy nhiên, việc phân tích chi tiết các kiểu hình phân tử và tế bào cũng như tính không đồng nhất của chúng ở các giai đoạn phát triển và trong các giường mạch khác nhau thường gặp khó khăn do sự phức tạp trong nuôi cấy tế bào nội mô chuột. Để khắc phục những hạn chế này, các nhà khoa học đã phát triển một dòng chuột biến đổi gen mới, biểu hiện kháng nguyên lớn SV40 tsA58 (tsA58T Ag) dưới sự kiểm soát của hệ thống biểu hiện nhị phân dựa trên tái tổ hợp Cre/loxP. Các tế bào nội mô dương tính với tsA58T Ag từ nuôi cấy nguyên phát của nhiều cơ quan có khả năng tăng sinh liên tục ở 33°C mà không bị lão hóa. Quần thể tế bào thu được bao gồm cả tế bào nội mô mạch máu và mạch bạch huyết, có thể phân lập bằng phương pháp miễn dịch chọn lọc. Ngay cả sau hai tháng nuôi cấy, các tế bào vẫn duy trì đặc tính của tế bào nội mô, được đánh giá thông qua biểu hiện các dấu ấn đặc hiệu nội mô và tín hiệu nội bào qua các thụ thể yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu VEGFR-2 và VEGFR-3, cũng như các đặc điểm sinh lý. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng đặc tính nội mô đặc hiệu của cơ quan, chẳng hạn như biểu hiện thụ thể hyaluronan mạch bạch huyết-1 (Lyve-1) trong tế bào nội mô xoang gan in vivo, được duy trì trong điều kiện in vitro. Kết quả này cho thấy hệ thống nuôi cấy tế bào biến đổi gen này hữu ích cho việc nuôi cấy tế bào nội mô chuột, cung cấp một phương pháp tiếp cận và ứng dụng thuận tiện cho việc nghiên cứu sinh học tế bào nội mô.

Mục lục chi tiết: