Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 76 trang
Dung lượng: 949 KB

Giới thiệu nội dung

Nghiên cứu sản xuất Interleukin-2 người tái tổ hợp dạng cải biến trên dòng tế bào Escherichia coli trong điều kiện GMP

Tác giả: Nguyễn Thị Minh Thu

Lĩnh vực: Sinh học thực nghiệm

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu tập trung vào việc sản xuất Interleukin-2 (IL-2) người tái tổ hợp dạng cải biến, sử dụng dòng tế bào Escherichia coli trong điều kiện GMP. IL-2 là một cytokine quan trọng trong hệ thống miễn dịch, có vai trò hỗ trợ và điều trị các bệnh ung thư như ung thư thận và ung thư hắc tố ác tính. Tuy nhiên, chế phẩm IL-2 thương mại có giá thành cao. Đề tài nhằm tối ưu hóa quy trình sản xuất IL-2 tái tổ hợp trong nước với chi phí thấp hơn, góp phần phục vụ công tác điều trị bệnh ung thư tại Việt Nam. Nghiên cứu đã tiến hành cải biến trình tự amino acid của IL-2 để tăng hoạt tính và tính an toàn, đồng thời tối ưu hóa biểu hiện protein trong hệ thống lên men 5 và 10 lít, sau đó tiền xử lý, tinh chế và xác định hoạt tính sinh học, độ sạch, độ an toàn của sản phẩm.

Mục lục chi tiết:

  • Lời cam đoan
  • Lời cảm ơn
  • Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt
  • Danh mục các hình
  • Danh mục các bảng
  • Mở đầu
  • Chương I. Tổng quan tài liệu
    • 1.1. Tình hình ung thư ở Việt Nam và trên thế giới
    • 1.2. Các phương pháp điều trị ung thư
    • 1.3. Tổng quan về Interleukin-2
      • 1.3.1. Cấu trúc của Interleukin-2
      • 1.3.2. Cơ chế hoạt động và chức năng sinh học của Interleukin-2
      • 1.3.3. Vai trò của Interleukin-2 trong điều trị ung thư
    • 1.4. Hệ biểu hiện E. coli
  • Chương II. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
    • 2.1. Vật liệu nghiên cứu
      • 2.1.1. Chủng giống và plasmid
      • 2.1.2. Hóa chất
      • 2.1.3. Máy móc và thiết bị
      • 2.1.4. Các môi trường và dung dịch
    • 2.2. Phương pháp nghiên cứu
      • 2.2.1. Biểu hiện protein Interleukin-2 tái tổ hợp trong tế bào E. coli ở các hệ thống lên men 5 và 10 lít
      • 2.2.2. Phá tế bào E. coli và xử lý IL-2 thô (tiền tinh chế)
      • 2.2.3. Tinh chế IL-2 bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC
      • 2.2.4. Xác định hoạt tính sinh học protein Interleukin-2 trên dòng tế bào CTLL2
      • 2.2.5. Kiểm tra tính đặc hiệu của protein bằng phương pháp Western blot
      • 2.2.6. Kiểm tra độ sạch bằng phần mềm Quantity One
      • 2.2.7. Kiểm tra nội độc tố bằng LAL kit
      • 2.2.8. Xác định hàm lượng protein trong mẫu tinh chế bằng phương pháp ELISA
      • 2.2.9. Điện di SDS-PAGE
  • Chương III. Kết quả và thảo luận
    • 3.1. Tối ưu lên men chủng E. coli BL21 IL-2 trên quy mô nồi lên men 5 và 10 lít
      • 3.1.1. Lên men chủng E. coli BL21-IL2 trong hệ thống lên men 5 lít
      • 3.1.2. Khảo sát thành phần dinh dưỡng và nồng độ chất cảm ứng
      • 3.1.3. Lên men chủng E. coli BL21-IL2 ở quy mô hệ thống lên men 10 lít đợt 1
      • 3.1.4. Lên men chủng E. coli BL21-IL2 ở hệ thống lên men 10 lít đợt 2
    • 3.2. Xử lý tiền tinh chế thu hồi IL-2 từ sinh khối tế bào lên men
    • 3.3. Tinh chế IL-2 bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC
    • 3.4. Xác định hoạt tính sinh học của IL-2 trên dòng tế bào CTLL2
    • 3.5. Xác định độ tinh sạch của protein IL-2 tái tổ hợp sau tinh chế bằng phần mềm Quantity One
    • 3.6. Xác định hàm lượng nội độc tố trong sản phẩm IL-2 sau tinh chế
  • Kết luận và kiến nghị
  • Tài liệu tham khảo
  • Danh mục các công trình khoa học liên quan