Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 67 trang
Dung lượng: 954 KB

Giới thiệu nội dung

Phát triển Các Fluorescent ATP Sensor Sử Dụng Tiểu Đơn Vị Epsilon Của Phân Tử F₁-ATPase/Synthase Và Các Biến Thể Của Green Fluorescent Protein

Tác giả: Huỳnh Nhật Phương Kim

Lĩnh vực: Công nghệ Sinh học

Nội dung tài liệu:

Đề tài nghiên cứu tập trung vào việc phát triển các cảm biến huỳnh quang (fluorescent ATP sensor) dựa trên tiểu đơn vị epsilon (ε) của phân tử F₁-ATPase/synthase và các biến thể của protein huỳnh quang xanh (green fluorescent protein). Các cảm biến này, được gọi là ATeam, được thiết kế để đo lường nồng độ ATP trong các tế bào sống.

Nghiên cứu đã xây dựng các phức hợp ATeam bằng cách kết hợp protein huỳnh quang màu xanh lam (CFP) hoặc Venus với tiểu đơn vị epsilon từ các nguồn vi khuẩn khác nhau như Escherichia coli (EF1ɛ), Bacillus clausii (BCLɛ), Bacillus megaterium (BMEɛ) và Bacillus pseudofirmus (BPFɛ). Các ATeam này được đánh giá về ái lực và khả năng đáp ứng với ATP trong điều kiện in vitro. Kết quả cho thấy ATeam từ BMEɛ, đặc biệt là ATeam BME-cp173Venus, thể hiện tiềm năng tốt nhất làm cảm biến ATP cho nội bào. Tuy nhiên, các ATeam từ BCLE gặp vấn đề về sự kết dính, cần có thêm nghiên cứu để khắc phục.

Mục lục chi tiết:

  • Lời cảm tạ
  • Tóm tắt khoá luận
  • Abstract
  • Mục lục
  • Danh sách các chữ viết tắt
  • Danh sách các bảng
  • Danh sách các hình
  • Chương 1. Mở đầu
    • 1.1. Đặt vấn đề
    • 1.2. Mục đích và yêu cầu
      • 1.2.1. Mục đích
      • 1.2.2. Yêu cầu
  • Chương 2. Tổng quan tài liệu
  • Chương 3. Vật liệu và phương pháp thí nghiệm
    • 3.1. Thời gian và địa điểm thực hiện khoá luận
    • 3.2. Vật liệu
    • 3.3. Phương pháp thí nghiệm
      • 3.2.1. Cấu trúc gen
        • 3.2.1.1. Tiểu đơn vị epsilon (ε) của F₀F₁-ATP synthase
        • 3.2.1.2. Protein huỳnh quang màu vàng (Venus)
        • 3.2.1.3. Cấu trúc chung của các ATeam
        • 3.2.1.4. Nhóm ATeam với EF1ɛ
        • 3.2.1.5. Nhóm ATeam với BMEɛ
        • 3.2.1.6. Nhóm ATeam với BCL ε
        • 3.2.1.7. ATeam BPFE-nVenus
      • 3.2.2. Kiểm tra cấu trúc của các ATeam
        • 3.2.2.1. Nhóm ATeam với monomeric Venus (nVenus)
        • 3.2.2.2. Nhóm ATeam với cpVenus
      • 3.2.3. Biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp
      • 3.2.4. Đánh giá các ATeam in vitro
        • 3.2.4.1. Đo quang phổ huỳnh quang của ATeam
        • 3.2.4.2. Đo timecourse của ATeam
        • 3.2.4.3. Công thức tính dynamic range
        • 3.2.4.4. Công thức tính hằng số phân ly
        • 3.2.4.5. Công thức tính tốc độ đáp ứng với ATP của ATeam
  • Chương 4. Kết quả và thảo luận
    • 4.1. Kết quả thí nghiệm
      • 4.1.1. Nhóm ATeam EF1e-nVenus và ATeam EF1e-cpVenus
      • 4.1.2. Kết quả sắc ký lọc gel của ATeam BME-nVenus, BCL-nVenus, BPF-nVenus
      • 4.1.3. Nhóm ATeam BME-nVenus và ATeam BME-cpVenus
      • 4.1.5. ATeam BPF-nVenus
      • 4.1.6. Nhóm ATeam với BCLE
    • 4.2. Thảo luận
  • Chương 5. Kết luận và đề nghị
  • Chương 6. Tài liệu tham khảo