Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 58 trang
Dung lượng: 809 KB

Giới thiệu nội dung

Nhân Dòng, Biểu Hiện, Tinh Sạch Và Xác Định Hoạt Tính Của Protein Kod DNA Polymerase Tái Tổ Hợp Ở E. Coli

Tác giả: Nguyễn Thị Uyên

Lĩnh vực: Di truyền học

Nội dung tài liệu:

Luận văn thạc sĩ khoa học này tập trung vào việc nhân dòng, biểu hiện, tinh sạch và xác định hoạt tính của protein KOD DNA polymerase tái tổ hợp trong E. coli. Nghiên cứu nhằm mục đích tạo ra KOD DNA polymerase tái tổ hợp bằng phương pháp đơn giản, góp phần sản xuất enzyme này với số lượng lớn, hướng tới làm chủ công nghệ tại Việt Nam.

KOD DNA polymerase là một enzyme có hoạt tính cao, được sử dụng rộng rãi trong kỹ thuật PCR để khuếch đại các đoạn DNA lớn, giải trình tự hệ gen, nghiên cứu đột biến và tổng hợp gen. Tuy nhiên, việc nhập khẩu enzyme này từ nước ngoài gặp nhiều khó khăn về giá thành, thời gian vận chuyển và chất lượng. Do đó, việc nghiên cứu sản xuất enzyme này tại Việt Nam là cần thiết.

Luận văn đề cập đến tổng quan về PCR, giới thiệu về DNA polymerase, đặc điểm và cấu trúc của KOD DNA polymerase, cũng như tình hình nghiên cứu liên quan. Các phương pháp nghiên cứu được trình bày bao gồm tối ưu hóa mã bộ ba, tổng hợp và nhân dòng gen KOD, thiết kế vector biểu hiện, biểu hiện protein tái tổ hợp trong E. coli, tinh sạch protein bằng phương pháp sắc ký ái lực và đánh giá hoạt tính enzyme.

Mục lục chi tiết:

  • Lời cảm ơn
  • Mục lục
  • Danh mục hình
  • Bảng ký hiệu các chữ cái viết tắt
  • Mở đầu
  • Chương 1 – Tổng quan về PCR
    • 1.1. Tổng quan về PCR
      • 1.1.1. Giới thiệu
      • 1.1.2. Ứng dụng của PCR
      • 1.1.3. Nguyên lý
      • 1.1.1. Thành phần phản ứng PCR
    • 1.2. Giới thiệu về DNA polymerase
      • 1.2.1. Giới thiệu chung
      • 1.2.2. Phân loại DNA polymerase dựa vào trình tự protein
      • 1.2.3. Các loại DNA polymerase thương mại
      • 1.2.4. Cấu trúc của DNA polymerase
    • 1.3. KOD DNA polymerase
      • 1.3.1. Tình hình nghiên cứu
      • 1.3.2. Giới thiệu về KOD
      • 1.3.3. Đặc điểm và cấu trúc
    • 1.4. Lựa chọn hệ thống biểu hiện
      • 1.4.1. Vật chủ biểu hiện
      • 1.4.2. Vector
    • 1.5. Phương pháp tinh sạch sử dụng sắc ký ái lực
      • 1.5.1. Sắc ký ái lực Nickel
      • 1.5.2. Sắc ký ái lực Glutathione
  • Chương 2 – Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
    • 2.1. Vật liệu và hóa chất
      • 2.1.1. Vật liệu
      • 2.1.2. Hóa chất
      • 2.1.3. Dụng cụ và thiết bị
    • 2.2. Phương pháp nghiên cứu
      • 2.2.1. Sơ đồ nghiên cứu
      • 2.2.2. Tổng hợp và nhân dòng gen KOD
      • 2.2.3. Thiết kế vector biểu hiện mang gen KOD
      • 2.2.4. Biểu hiện protein tái tổ hợp
      • 2.2.5. Tinh sạch protein sử dụng sắc ký ái lực
      • 2.2.6. Thẩm tách protein
      • 2.2.7. Thử hoạt tính enzyme
  • Chương 3 – Kết quả và thảo luận
    • 3.1. Nhân dòng gen KOD
      • 3.1.1. Tối ưu mã bộ ba và tổng hợp gen KOD
      • 3.1.2. Khuếch đại đoạn chèn bằng phản ứng PCR
      • 3.1.3. Chèn đoạn gen mã hóa KOD vào vector biểu hiện pET-M và pGEX-4T-1
      • 3.1.4. Kết quả tách chiết plasmid DNA
      • 3.1.5. Giải trình tự plasmid
    • 3.2. Biểu hiện protein tái tổ hợp
    • 3.3. Tinh sạch protein sử dụng sắc ký ái lực
      • 3.3.1. Tinh sạch protein bằng phương pháp sắc ký ái lực Nickel
      • 3.3.2. Tinh sạch protein bằng phương pháp sắc ký ái lực GST
    • 3.4. Thẩm tách protein
    • 3.5. Thử hoạt tính enzyme
  • Kết luận và kiến nghị
  • Tài liệu tham khảo