Báo cáo khoa học: Functional expression of the quinoline 2-oxidoreductase genes (qorMSL) in Pseudomonas putida KT2440 pUF1 and in P. putida 86-1 Dqor pUF1 and analysis of the Qor proteins

Functional Expression of the Quinoline 2-Oxidoreductase Genes (qorMSL) in Pseudomonas putida KT2440 pUF1 and in P. putida 86-1 Δqor pUF1 and Analysis of the Qor Proteins

Tác giả: Ursula Frerichs-Deeken, Birgit Goldenstedt, Renate Gahl-Janßen, Reinhard Kappl, Jürgen Hüttermann, and Susanne Fetzner

Lĩnh vực: Vi sinh vật học, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc biểu hiện chức năng của gen quinoline 2-oxidoreductase (Qor) từ *Pseudomonas putida* 86 trong các chủng *P. putida* khác nhau. Mục tiêu là xây dựng một hệ thống biểu hiện gen hiệu quả cho các enzyme hydroxylase chứa molypden, đặc biệt là những enzyme sử dụng đồng yếu tố Mo-MCD. Các nhà nghiên cứu đã thử nghiệm biểu hiện gen *qorMSL* trên *P. putida* KT2440 và một chủng đột biến *P. putida* 86-1 Δqor. Kết quả cho thấy *P. putida* KT2440 pUF1 biểu hiện protein Qor với hoạt tính thấp hơn đáng kể so với Qor hoang dã, có thể do sự thiếu hụt molypden hoặc sự lắp ráp không hoàn chỉnh của đồng yếu tố. Ngược lại, chủng *P. putida* 86-1 Δqor pUF1 biểu hiện protein Qor có hoạt tính và các đặc tính động học, quang phổ tương tự như Qor hoang dã, cho thấy chủng đột biến này là một vật chủ tiềm năng cho việc biểu hiện các gen hydroxylase chứa Mo-MCD khác. Nghiên cứu cũng phân tích chi tiết các trung tâm hoạt động oxy hóa khử và các thành phần của đồng yếu tố trong các protein Qor được biểu hiện.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Vật liệu và phương pháp
• Plasmid, chủng vi khuẩn và điều kiện nuôi cấy
• Kỹ thuật DNA
• Xây dựng *P. putida* 86-1 Δqor
• Biểu hiện gen *qorMSL*
• Tăng trưởng của các chủng tái tổ hợp và chuẩn bị chiết xuất thô
• Kết quả và thảo luận
• Protein Qor từ *P. putida* KT2440 pUF1
• *P. putida* 86-1 Δqor
• Điều kiện tổng hợp Qor ở chủng hoang dã *P. putida* 86, *P. putida* 86 pJB653 và *P. putida* 86-1 Δqor pUF1
• Protein Qor từ *P. putida* 86-1 Δqor pUF1
• Đặc tính động học của các protein Qor từ *P. putida* 86, *P. putida* KT2440 pUF1 và *P. putida* 86-1 Δqor pUF1
• Hàm lượng kim loại của protein Qor và phân tích các nucleotide được giải phóng từ protein Qor từ *P. putida* 86, *P. putida* KT2440 pUF1 và *P. putida* 86-1 Δqor pUF1
• Phổ UV/nhìn thấy của các protein Qor từ *P. putida* 86, *P. putida* KT2440 pUF1 và *P. putida* 86-1 Δqor pUF1
• Phân tích các trung tâm oxy hóa khử trong Qor từ *P. putida* KT2440 pUF1 và *P. putida* 86-1 Δqor pUF1 bằng phổ EPR
• Kết luận
• Lời cảm ơn
• Tài liệu tham khảo