Báo cáo khoa học: Efficient inhibition of b-secretase gene expression in HEK293 cells by tRNAVal-driven and CTE-helicase associated hammerhead ribozymes

Efficient Inhibition of β-Secretase Gene Expression in HEK293 Cells by tRNA^Val-Driven and CTE-Helicase Associated Hammerhead Ribozymes

Tác giả: Barbara Nawrot, Slawomir Antoszczyk, Maria Maszewska, Tomoko Kuwabara, Masaki Warashina, Kazunari Taira, and Wojciech J. Stec

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày một phương pháp hiệu quả để kiểm soát sự biểu hiện của gen β-secretase (BACE) bằng cách sử dụng các ribozyme hammerhead được điều khiển bởi tRNA^Val và liên kết với helicase CTE. Các ribozyme này được thiết kế để nhắm mục tiêu vào mRNA của BACE, enzyme chịu trách nhiệm chính trong việc tạo ra peptide β-amyloid (Aβ), một thành phần quan trọng trong các mảng amyloid ở bệnh nhân Alzheimer. Các thí nghiệm trên tế bào HEK293 cho thấy các ribozyme này có khả năng ức chế đáng kể sự biểu hiện của gen BACE ở cả cấp độ mRNA (lên đến 95%) và protein (lên đến 90%). Sự ức chế hoạt tính của BACE đã dẫn đến giảm đáng kể lượng peptide Aβ ngoại bào và nội bào. Kết quả này cho thấy tiềm năng của các ribozyme được thiết kế như vậy như là công cụ phân tử để điều chỉnh sự biểu hiện gen và là tác nhân trị liệu tiềm năng cho bệnh Alzheimer.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Vật liệu và phương pháp
• Thiết kế ribozyme
• Nuôi cấy tế bào, chuyển gen và ly giải tế bào
• Tách chiết RNA tổng số từ dịch ly giải tế bào
• Xác định mức độ biểu hiện mRNA BACE và RNA ribozyme trong tế bào động vật có vú
• Hoạt động của ribozyme trong tế bào HEK293
• Ảnh hưởng của biểu hiện ribozyme đến mức độ protein BACE và peptide β-amyloid
• Thảo luận
• Lời cảm ơn
• Tài liệu tham khảo