Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 10 trang
Dung lượng: 242 KB

Giới thiệu nội dung

Charging of tRNA with Non-Natural Amino Acids at High Pressure

Tác giả: Malgorzata Giel-Pietraszuk and Jan Barciszewski

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày một phương pháp đơn giản và hiệu quả để thực hiện quá trình aminoacyl hóa tRNA với các axit amin tự nhiên và không tự nhiên dưới áp suất cao. Phương pháp này có tiềm năng ứng dụng trong kỹ thuật protein, cho phép đưa các axit amin phi tự nhiên vào protein một cách có chủ đích. Kết quả cho thấy quá trình aminoacyl hóa dưới áp suất cao có thể sử dụng các loại tRNA khác nhau và liên kết axit amin chủ yếu xảy ra tại nhóm hydroxyl của vòng ribose ở đầu 3′ của tRNA. Các phân tích bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép khối phổ (HPLC-MS) đã xác nhận sự hình thành aminoacyl-tRNA (aa-tRNA) với các axit amin phi tự nhiên.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Abstract
  • Introduction
  • Results
  • HPLC-MS analysis
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Transfer RNA
  • Uniformly radiolabelled amino acids
  • Aminoacylation of tRNA at high pressure
  • Detection of aa-tRNA using acidic/urea gels electrophoresis
  • Enzymatic aminoacylation of tRNA
  • Coupled in vitro transcription/translation
  • HPLC/ESI/MS analysis
  • Dephosphorylation of CoA and acetyl-CoA
  • Aminoacylation of CoA at high pressure
  • TLC of aminoacyl-CoA
  • Acknowledgements
  • References