Báo cáo khóa học: Mutations in the hydrophobic core and in the protein–RNA interface affect the packing and stability of icosahedral viruses

Mutations in the hydrophobic core and in the protein-RNA interface affect the packing and stability of icosahedral viruses

Tác giả: Sheila M. B. Lima, David S. Peabody, Jerson L. Silva, and Andréa C. de Oliveira

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Genetics, Microbiology

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này khám phá cách thức sự đóng gói và độ bền của vỏ virus hình khối mặt cầu (icosahedral) bị ảnh hưởng bởi các thay đổi axit amin đơn lẻ trong protein vỏ. Sử dụng các phương pháp như huỳnh quang tryptophan, huỳnh quang bis-8-anilinonaphthalene-1-sulfonate, CD và tán xạ ánh sáng, các nhà nghiên cứu đã đo lường các tác động của urê và áp suất lên virus MS2 thể thực khuẩn (bacteriophage) và các thể đột biến nhạy cảm với nhiệt độ. Kết quả cho thấy các hạt đột biến M88V và T45S kém bền hơn dạng hoang dã (wild-type) và phân ly hoàn toàn dưới áp suất 3.0 kbar. Các thể đột biến này cũng kém bền hơn khi có urê. Sự kém bền của hạt M88V có thể liên quan đến sự gia tăng khoang rỗng trong lõi kỵ nước. Ngược lại, thể đột biến D11N lại bền hơn dạng hoang dã, mặc dù cũng có kiểu hình tăng trưởng nhạy cảm với nhiệt độ. Nghiên cứu chỉ ra rằng các đột biến điểm trong protein vỏ, ảnh hưởng đến sự đóng gói hoặc tương tác tại giao diện protein-RNA, dẫn đến những thay đổi trong độ bền của virus.

Mục lục chi tiết:
– Experimental procedures
– Chemicals
– MS2 bacteriophage and mutant samples
– Spectroscopic measurements under pressure
– Light scattering
– Chemical denaturation
– Size-exclusion chromatography
– CD
– Infectivity assays
– Isolation of ts coat mutants
– Results
– Chemical stability of ts MS2 coat mutants
– Pressure stability of the MS2 bacteriophage and ts mutants
– Changes in secondary structure upon dissociation and denaturation
– Bis-ANS binding assay of MS2 and ts mutants
– Discussion