Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 326 KB

Giới thiệu nội dung

Mouse spermine oxidase gene splice variants: Nuclear subcellular localization of a novel active isoform

Tác giả: Manuela Cervelli, Alessandro Bellini, Marzia Bianchi, Lucia Marcocci, Stefania Nocera, Fabio Polticelli, Rodolfo Federico, Roberto Amendola, Paolo Mariottini

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào các biến thể splice của gen spermine oxidase (SMO) ở chuột, đặc biệt là việc xác định vị trí dưới tế bào hạt nhân của một dạng hoạt động mới. Nghiên cứu đã đặc trưng hóa tám biến thể splice gen bổ sung, và cho thấy rằng một dạng hoạt động mới, mSMOμ, được tìm thấy ở cả khoang nhân và tế bào chất. Ngược lại, dạng mSMOa hoạt động chính lại chỉ được xác định ở tế bào chất. Nghiên cứu cũng đã đánh giá mức độ biểu hiện tương đối của các biến thể splice gen thông qua phân tích RT-PCR để xác minh mối quan hệ với hoạt động của enzyme SMO trong các cơ quan khác nhau của chuột.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
  • Động vật và lấy mẫu cơ quan
  • Chuẩn bị dịch huyền phù mô và tế bào
  • Hoạt động của amine oxidase trong dịch huyền phù mô và tế bào
  • Phương pháp DNA và xây dựng các plasmid biểu hiện mSMO
  • Nhân dòng biến thể splice mSMO
  • Phân tích RT-PCR của các biến thể splice gen mSMO trong các mô chuột khác nhau
  • Biểu hiện các biến thể splice gen mSMO trong tế bào E. coli
  • Tinh sạch nhanh các dạng SMO bằng hệ thống His-Tag (HT)
  • Xác định hoạt động enzyme và các hằng số động học của dạng SMO tái tổ hợp
  • Biểu hiện các biến thể splice gen mSMO trong tế bào thần kinh đệm chuột N18TG2
  • Kết quả
  • Nhân dòng, giải trình tự các biến thể splice mSMO và phân tích trình tự
  • Cấu trúc exon của các biến thể splice gen spermine oxidase ở chuột (mSMO)
  • Căn chỉnh trình tự axit amin của các dạng spermine oxidase ở chuột (mSMO)
  • Biểu hiện và tinh sạch các dạng mSMO trong tế bào E. coli
  • Đặc tính động học của dạng SMOµ
  • Tích lũy mRNA của các biến thể splice gen mSMO và hoạt động amino oxidase trong các cơ quan chuột
  • Phân tích RT-PCR về mức độ mRNA và hoạt động enzyme amino oxidase của các biến thể splice gen spermine oxidase ở chuột (mSMO)
  • Vị trí dưới tế bào của các dạng protein spermine oxidase ở chuột (mSMO) trong dòng tế bào thần kinh đệm chuột N18TG2
  • Căn chỉnh trình tự axit amin của exon VIa
  • Thảo luận
  • Tài liệu tham khảo