Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 202 KB

Giới thiệu nội dung

Quantitative analysis, using MALDI-TOF mass spectrometry, of the N-terminal hydrolysis and cyclization reactions of the activation process of onconase

Tác giả: Marc Ribó, Montserrat Bosch, Gerard Torrent, Antoni Benito, Bruno Beaumelle and Maria Vilanova

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích định lượng hai phản ứng chính trong quá trình hoạt hóa onconase, một protein ribonuclease có hoạt tính chống ung thư. Cụ thể, nghiên cứu sử dụng kỹ thuật MALDI-TOF MS để theo dõi phản ứng thủy phân gốc methionyl (Met1) và phản ứng đóng vòng nội phân tử của gốc glutaminyl (Gln1) thành pyroglutamyl (Pyr1) ở đầu N-terminus của onconase. Các tác giả đã xác định các điều kiện tối ưu cho cả hai phản ứng, bao gồm nồng độ guanidinium chloride, pH và nhiệt độ, nhằm mục đích tối ưu hóa quy trình sản xuất onconase hoạt động đầy đủ. Kết quả nghiên cứu cung cấp cái nhìn sâu sắc về cơ chế hoạt hóa protein và có thể áp dụng cho việc tối ưu hóa các protein tái tổ hợp khác.

Mục lục chi tiết:

  • Quantitative analysis, using MALDI-TOF mass spectrometry, of the N-terminal hydrolysis and cyclization reactions of the activation process of onconase
  • Materials and methods
  • Protein expression
  • Protein purification
  • Hydrolysis and cyclization as a function of guanidinium chloride concentration and pH
  • MALDI-TOF MS
  • Activation of onconase
  • Determination of conformational stability
  • Cytotoxicity assays
  • Other methods
  • Results
  • Expression and purification of recombinant onconases
  • Reaction monitoring by MALDI-TOF MS
  • Characterization of the hydrolysis reaction
  • Characterization of the intramolecular cyclization reaction
  • Preparative activation
  • Contribution of Met1 hydrolysis and pyroglutamyl formation to the conformational stability of active onconase
  • Cytotoxic activity
  • Discussion
  • Hydrolysis reaction
  • Cyclization reaction
  • Concluding remarks
  • Acknowledgements
  • References