Báo cáo khóa học: Functional analyses of placental protein 13/galectin-13

Functional Analyses Of Placental Protein 13/Galectin-13

Tác giả: Nandor G. Than, Elah Pick, Szabolcs Bellyei, Andras Szigeti, Ora Burger, Zoltan Berente, Tamas Janaky, Arpad Boronkai, Harvey Kliman, Hamutal Meiri, Hans Bohn, Gabor N. Than và Balazs Sumegi

Lĩnh vực: Sinh hóa, Y học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích chức năng của Protein nhau thai 13 (PP13), còn được gọi là galectin-13. PP13, được phân lập từ nhau thai người, cho thấy sự tương đồng về cấu trúc và chức năng với các thành viên khác của họ galectin. Nghiên cứu đã xác nhận hoạt tính lysophospholipase yếu của PP13, khả năng liên kết với carbohydrate (đặc biệt là N-acetyl-lactosamine và mannose), và khả năng ngưng kết hồng cầu. Một phát hiện quan trọng là PP13 tạo thành thể song hợp thông qua liên kết disulfide, khác với các galectin mẫu khác. Các nghiên cứu cũng xác định sự hiện diện của các vị trí phosphoryl hóa và mối liên hệ tiềm năng của PP13 với các protein như annexin II và beta/gamma actin trong các tế bào nhau thai và gan thai nhi. Vị trí của PP13 chủ yếu nằm ở màng viền bàn chải của tế bào syncytiotrophoblast trong nhau thai người. Nghiên cứu này cung cấp cái nhìn sâu sắc về vai trò tiềm năng của PP13/galectin-13 trong các chức năng cầm máu và miễn dịch sinh học, cũng như vai trò phát triển của nó trong nhau thai.

Mục lục chi tiết:

• Functional analyses of PP13/galectin-13
• Keywords: brush border membrane; carbohydrate binding; galectin; lysophospholipase; placental protein.
• Introduction
• Experimental procedures
• Materials
• Databank search
• Construction of bacterial PP13/galectin-13 expression plasmids
• Expression and purification of recombinant PP13/galectin-13
• Preparation of monoclonal antibodies to PP13/galectin-13
• PP13/galectin-13 lysophospholipase and phospholipase activity detection by NMR
• PP13/galectin-13 sugar binding assays
• PP13/galectin-13 haemagglutination assay
• PP13/galectin-13 dimerization assay
• Pro-Q Diamond phosphoprotein gel staining
• Cell culture
• Tissue preparations
• Affinity purification of PP13/galectin-13 bound proteins
• Protein identification by mass spectrometry
• SDS/PAGE and Western blotting
• Immunohistochemistry
• Immunofluorescence confocal microscopy
• Statistical evaluation
• Results
• PP13/galectin-13 is a member of a new subfamily among prototype galectins
• PP13/galectin-13 possesses weak endogenous LPLA activity
• PP13/galectin-13 has strong sugar binding capabilities
• PP13/galectin-13 possesses lectin activity
• PP13/galectin-13 dimerizes via disulphide bonds
• Placental expressed PP13/galectin-13 is phosphorylated
• PP13/galectin-13 binds annexin II and beta/gamma actin
• Polyclonal and monoclonal antibodies to PP13 have specific recognition to PP13/galectin-13
• PP13/galectin-13 is localized predominantly on the brush border membrane of placental syncytiotrophoblasts
• Discussion
• Acknowledgements
• References