Báo cáo khoa học: Cloning and characterization of the genes encoding toxic lectins in mistletoe (Viscum album L)

Cloning And Characterization Of The Genes Encoding Toxic Lectins In Mistletoe (Viscum Album L)

Tác giả: Alma G. Kourmanova, Olga J. Soudarkina, Sjur Olsnes, Jurij V. Kozlov

Lĩnh vực: Sinh hóa học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập, mô tả và xác định trình tự gen của ba biến thể gen mã hóa các lectin độc từ cây tầm gửi (Viscum album L), được gọi là MLI, MLII và MLIII. Các gen này, được ký hiệu là ml1p, ml2p và ml3p, được biểu hiện với các tỷ lệ khác nhau trong DNA bộ gen và mRNA của cây tầm gửi. Nghiên cứu đã thành công trong việc biểu hiện các chuỗi A tái tổ hợp của các gen này trong E. coli và đánh giá hoạt tính sinh học của chúng. Phân tích trình tự và so sánh với các protein liên quan đã cho thấy sự tương đồng đáng kể và làm sáng tỏ cấu trúc cũng như chức năng của các lectin độc này, đồng thời cung cấp cái nhìn sâu sắc về mối quan hệ tiến hóa của chúng.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Vật liệu và phương pháp
• Vật liệu thực vật
• Phân lập RNA thực vật và tổng hợp cDNA
• Khuếch đại các đoạn ML bộ gen bằng các mồi lặp lại
• Khuếch đại nhanh 5′ và 3′ của các đầu cuối cDNA (RACE)
• Khuếch đại trình tự mã hóa đầy đủ của gen mlp
• Phân tích trình tự
• Xây dựng các plasmid biểu hiện cho các chuỗi A tái tổ hợp của MLp
• Biểu hiện các chuỗi A trong E. coli
• Phân lập các chuỗi A tái tổ hợp
• SDS/PAGE và Western blotting
• Hoạt tính của các chuỗi A tái tổ hợp trong hệ thống ly giải hồng cầu lưới
• Kết quả
• Danh pháp của các lectin độc cây tầm gửi và gen của chúng
• Phân lập các trình tự của gen mlp
• Ước tính tỷ lệ định lượng của ba biến thể gen mlp trong DNA bộ gen và các bản phiên mã của chúng trong mRNA
• Kích thước của họ gen lectin độc cây tầm gửi
• Biểu hiện và hoạt tính sinh học của các chuỗi A tái tổ hợp MLp
• Nhận dạng miễn dịch của các chuỗi A tái tổ hợp MLp
• Thảo luận
• Tài liệu tham khảo
• Tài liệu bổ sung