Báo cáo khoa học: Protein kinase Ch activity is involved in the 2,3,7,8tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced signal transduction pathway leading to apoptosis in L-MAT, a human lymphoblastic T-cell line

PKCθ in TCDD-induced signaling for apoptosis

Tác giả: Sohel Ahmed, Masahiko Shibazaki, Takashi Takeuchi and Hideaki Kikuchi

Lĩnh vực: Department of Molecular Genetics, Institute of Development, Aging and Cancer, Tohoku University, Sendai, Japan

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của hoạt động protein kinase C (PKC)θ trong cơ chế truyền tín hiệu không phụ thuộc thụ thể hydrocarbon thơm (AhR) dẫn đến hiện tượng chết theo chương trình (apoptosis) trong dòng tế bào lympho T L-MAT do 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) gây ra. Các bằng chứng cho thấy rottlerin, một chất ức chế chọn lọc nPKC, có khả năng ngăn chặn hoàn toàn hiện tượng apoptosis do TCDD gây ra. PKCθ là dạng nPKC chủ yếu biểu hiện trong dòng tế bào L-MAT. Các peptide ức chế PKCθ cũng ngăn chặn hiệu quả apoptosis và hoạt động kinase của PKCθ trong ống nghiệm. TCDD làm tăng hoạt động kinase nPKC và gây ra sự dịch chuyển của PKCθ từ bào tương sang màng tế bào. Việc biểu hiện quá mức dạng bất hoạt của PKCθ cũng bảo vệ tế bào khỏi apoptosis do TCDD gây ra. Kết quả nghiên cứu nhấn mạnh vai trò quan trọng của con đường tín hiệu PKCθ trong độc tính miễn dịch của TCDD.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Correspondence
• Results
• Inhibition of TCDD-induced L-MAT cell apoptosis by rottlerin, an nPKC inhibitor
• PKCθ is a major isoform of nPKC in the L-MAT cell line
• TCDD-induced L-MAT cell apoptosis is completely blocked by myristoylated-PKCθ-pseudosubstrate peptide inhibitor (myr-PKCθ PPI)
• TCDD induces nPKC kinase activity in L-MAT cells
• PKCθ is translocated in TCDD-treated L-MAT cells
• Over-expression of DN PKCθ in L-MAT cells confers protection against TCDD-induced apoptosis
• Discussion
• Participation of PKCθ in TCDD-induced apoptosis
• Possible events downstream of PKCθ in TCDD-induced apoptosis
• Significance of TCDD-induced L-MAT cell apoptosis
• Experimental procedures
• Cell culture
• Apoptosis assay by determination of acetyl-Asp-Glu-Val-Asp/7-amino-4-methylcoumarin (AcDEVD-AMC) cleavage
• RNA isolation and RT-PCR
• Cell lysis, immunoprecipitation, and Western blotting analysis
• In vitro kinase assay for nPKC
• Subcellular fractionation for nPKC translocation assay
• Plasmids and subcloning
• Transient transfection assay
• Immunofluorescence microscopy for transient gene expression analysis
• Magnetic separation of transfected L-MAT cells for functional assay
• Acknowledgements
• References