Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: 301 KB

Giới thiệu nội dung

A Novel Hyperthermostable 5′-Deoxy-5′-methylthioadenosine Phosphorylase from the Archaeon Sulfolobus Solfataricus

Tác giả: Giovanna Cacciapuoti, Sabrina Forte, Maria Angela Moretti, Assunta Brio, Vincenzo Zappia, và Marina Porcelli

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử, Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày việc phân tích phân tử đầu tiên về enzyme 5′-deoxy-5′-methylthioadenosine phosphorylase II (SsMTAPII) từ archaeon Sulfolobus solfataricus. Enzyme được biểu hiện quá mức trong Escherichia coli và tinh sạch. SsMTAPII là một homohexamer với ái lực rất thấp đối với 5′-deoxy-5′-methylthioadenosine và hoạt động tối ưu ở nhiệt độ 120 °C, thể hiện tính siêu chịu nhiệt và siêu bền nhiệt. Các thí nghiệm về phân giải protein cho thấy một vị trí cắt duy nhất ở vùng C-terminal, cần thiết cho sự toàn vẹn của vị trí hoạt động. Các đột biến tại các cysteine Cys259, Cys261 và Cys262 ảnh hưởng đáng kể đến tính siêu chịu nhiệt và siêu bền nhiệt của enzyme. Phân tích động học so sánh với SsMTAP cho thấy SsMTAPII là enzyme đầu tiên được phân lập từ Archaea có khả năng nhận diện adenosine như một cơ chất, đồng thời có ái lực cực cao đối với MTA, cho thấy vai trò sinh lý của nó trong quá trình dị hóa MTA.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả và Thảo luận
  • Nhân bản, so sánh trình tự sơ cấp và biểu hiện
  • Tính siêu chịu nhiệt, độ bền và sự bảo vệ cơ chất
  • Các thay đổi cấu trúc do cơ chất gây ra
  • Tác động của các tác nhân khử lên độ bền enzyme
  • Tác động của đột biến lên tính siêu chịu nhiệt của enzyme
  • Đặc tính động học so sánh của SsMTAP và SsMTAPII
  • Thủ tục thí nghiệm
  • Nuôi cấy vi khuẩn, plasmid, enzyme và hóa chất
  • Định lượng enzyme
  • Phân tích các hằng số động học
  • Phương pháp phân tích protein
  • Nghiên cứu độ bền và tính siêu chịu nhiệt
  • Nhân bản và biểu hiện gen mã hóa SsMTAPII
  • Thí nghiệm phân giải protein hạn chế
  • Căn chỉnh trình tự đa dạng
  • Đột biến định hướng vị trí
  • Phổ huỳnh quang
  • Các thí nghiệm cân bằng về sự mất cấu trúc và tái cấu trúc do guanidinium chloride gây ra