Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 13 trang
Dung lượng: 477 KB

Giới thiệu nội dung

Identification of the gene encoding a type 1 RNase H with an N-terminal double-stranded RNA binding domain from a psychrotrophic bacterium

Tác giả: Takashi Tadokoro, Hyongi Chon, Yuichi Koga, Kazufumi Takano, và Shigenori Kanaya

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này báo cáo việc phân lập, biểu hiện và đặc tính hóa sinh học của gen mã hóa một loại RNase H loại 1 mới, có tên gọi là SIB1 RBD-RNase HI, từ vi khuẩn ưa lạnh Shewanella sp. SIB1. Protein tái tổ hợp này có một miền liên kết RNA chuỗi kép (RBD) ở đầu N-terminal, một đặc điểm thường thấy ở RNase H loại 1 ở sinh vật nhân chuẩn. Phân tích cho thấy miền RBD này có khả năng liên kết với chuỗi lai RNA/DNA, cho thấy vai trò của nó trong việc liên kết cơ chất. SIB1 RBD-RNase HI cho thấy hoạt tính enzyme cả trong ống nghiệm và trong cơ thể sống, với các yêu cầu về pH và ion kim loại tương tự như các RNase H loại 1 khác. Tuy nhiên, nó thể hiện hoạt tính đặc hiệu thấp hơn đối với các cơ chất oligomeric và kém ổn định hơn so với RNase H của E. coli. Nghiên cứu này cũng chỉ ra rằng các miền RBD-RNase HI được tìm thấy ở nhiều loại vi khuẩn và vi khuẩn cổ.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Từ khóa
  • Tác giả liên hệ
  • Tóm tắt
  • Nội dung tài liệu
  • Mục lục chi tiết
  • Kết quả và Thảo luận
  • Phân lập gen
  • Trình tự axit amin
  • Thử nghiệm bổ sung cho hoạt tính RNase H
  • Biểu hiện quá mức và tinh sạch SIB1 RBD-RNase HI
  • Hoạt tính enzyme
  • Độ đặc hiệu phân cắt
  • Khả năng liên kết của RBD với chuỗi lai RNA/DNA
  • Độ ổn định nhiệt
  • Đa dạng của các gen rnh
  • Quy trình thực nghiệm
  • Tế bào và plasmid
  • Phân lập gen
  • Dựng các plasmid
  • Biểu hiện quá mức và tinh sạch
  • Sắc ký lọc gel
  • Hoạt tính enzyme
  • Thử nghiệm dịch chuyển gel
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo