Báo cáo Y học: Effect of the disease-causing mutations identified in human ribonuclease (RNase) H2 on the activities and stabilities of yeast RNase H2 and archaeal RNase HII

Effect of the disease-causing mutations identified in human ribonuclease (RNase) H2 on the activities and stabilities of yeast RNase H2 and archaeal RNase HII

Tác giả: Muhammad S. Rohman, Yuichi Koga, Kazufumi Takano, Hyongi Chon, Robert J. Crouch, Shigenori Kanaya

Lĩnh vực: Sinh hóa học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích ảnh hưởng của các đột biến gây bệnh trong ribonuclease H2 (RNase H2) ở người lên hoạt tính và độ ổn định của RNase H2 ở nấm men Saccharomyces cerevisiae (Sc-RNase H2) và RNase HII ở vi khuẩn cổ Thermococcus kodakaraensis (Tk-RNase HII). RNase H2 ở người khi bị đột biến ở bất kỳ một trong ba tiểu đơn vị nào đều có thể gây ra hội chứng Aicardi-Goutières. Để làm rõ tác động này, các nhà khoa học đã tạo ra các protein đột biến của Sc-RNase H2 và Tk-RNase HII. Kết quả cho thấy một số đột biến làm giảm đáng kể hoạt tính enzym mà không ảnh hưởng nghiêm trọng đến độ ổn định của phức hợp. Đặc biệt, đột biến Glycine ở vị trí bảo tồn trong Tk-RNase HII đã làm giảm độ ổn định và hoạt tính của protein. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng Glycine đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì hoạt tính và độ ổn định của Tk-RNase HII, và các chuỗi bên lớn hơn có thể gây ra thay đổi cấu trúc cục bộ, ảnh hưởng đến khả năng gắn kết với cơ chất và hoạt tính.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Results and Discussion
• Overproduction and purification of Sc-RNase H2
• Enzymatic activity of Sc-RNase H2*
• Construction of mutant proteins of Sc-RNase H2*
• Enzymatic activities of mutant proteins of Sc-RNase H2*
• Construction of mutant proteins of Tk-RNase HII
• Binding analyses using BIAcore system
• Stabilities of mutant proteins of Tk-RNase HII
• Role of Gly10 of Tk-RNase HII
• Conclusion
• Experimental procedures
• Cells and plasmids
• Plasmid construction
• Site-directed mutagenesis
• Overproduction and purification
• Enzymatic activity
• Binding analysis of proteins to RNA/DNA hybrid
• CD spectra
• Thermal denaturation
• Acknowledgements
• References