Luận án Tiến sĩ Sinh học: Nghiên cứu hiện tượng Methyl hóa vùng Promoter gen GSTP1 trong quá sản lành tính và ung thư tuyến tiền liệt

Nghiên Cứu Hiện Tượng Methyl Hóa Vùng Promoter Gen GSTP1 Trong Quá Sản Lành Tính Và Ung Thư Tuyến Tiền Liệt

Tác giả: Vương Diệu Linh

Lĩnh vực: Sinh học

Nội dung tài liệu:

Luận án tiến sĩ này tập trung nghiên cứu hiện tượng methyl hóa DNA, một biến đổi di truyền ngoại gen quan trọng liên quan đến sự phát sinh và phát triển của nhiều loại ung thư. Cụ thể, đề tài đi sâu vào nghiên cứu methyl hóa vùng promoter của gen GSTP1, một gen mã hóa cho enzym tham gia khử các độc tố gây ung thư, trong các trường hợp quá sản lành tính và ung thư tuyến tiền liệt. Nghiên cứu nhằm mục đích tối ưu hóa kỹ thuật và đánh giá độ nhạy của phương pháp MS-PCR để phát hiện methyl hóa promoter gen GSTP1, xác định mối liên quan giữa hiện tượng này với các đặc điểm lâm sàng của bệnh, và phát triển kỹ thuật lai điểm nhằm nâng cao độ nhạy và độ chính xác trong việc phát hiện methyl hóa promoter gen GSTP1 trên các mẫu bệnh phẩm.

Mục lục chi tiết:

• DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC CÁC HÌNH
• DANH MỤC CÁC BẢNG
• MỞ ĐẦU
• CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN
  • 1.1. Ung thư
    • 1.1.1. Thực trạng ung thư
    • 1.1.2. Cơ sở tế bào học ung thư
    • 1.1.3. Di truyền học ung thư
  • 1.2. Di truyền ngoại gen và ung thư.
    • 1.2.1. Di truyền ngoại gen
    • 1.2.2. Biến đổi histone trong ung thư
    • 1.2.3. Methyl hóa DNA
    • 1.2.4. Methyl hóa DNA bất thường trong ung thư..
  • 1.3. Ung thư tuyến tiền liệt
    • 1.3.1. Phân độ trong ung thư tuyến tiền liệt.
    • 1.3.2. Methyl hóa DNA trong ung thư tuyến tiền liệt.
    • 1.3.3. Cấu trúc và chức năng gen GSTP1
  • 1.4. Phương pháp phân tích methyl hóa DNA.
    • 1.4.1. Phương pháp COBRA (Combined Bisulfite Restriction Analysis)
    • 1.4.2. Phương pháp PCR đặc hiệu methyl MS-PCR (Methylation specific Polymerase chain reaction).
    • 1.4.3. Phương pháp định lượng qMS-PCR.
  • 1.5. Dấu chuẩn sinh học hỗ trợ chẩn đoán, tiên lượng bệnh ung thư
    • 1.5.1. Dấu chuẩn sinh học sử dụng cho ung thư
    • 1.5.2. Dấu chuẩn sinh học sử dụng cho ung thư tuyến tiền liệt.
    • 1.5.3. Triển vọng của các bộ kit sử dụng dấu chuẩn methyl hóa DNA
  • 1.6. Nghiên cứu methyl hóa DNA trong ung thư ở Việt Nam
• CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.
  • 2.1. Nguyên liệu
    • 2.1.1. Mẫu nghiên cứu
    • 2.1.2. Các vật liệu
    • 2.1.3. Hóa chất
  • 2.2. Thiết bị chính
  • 2.3. Phương pháp nghiên cứu
    • 2.3.1. Chuẩn bị mẫu để tách chiết DNA.
    • 2.3.2. Nuôi cấy dòng tế bào ung thư tuyến tiền liệt PC3
    • 2.3.3. Tách chiết DNA tổng số…
    • 2.3.4. Xử lý DNA tổng số với bisulfite
    • 2.3.5. Tách dòng.
    • 2.3.6. Phương pháp PCR
    • 2.3.7. Phương pháp lai điểm
    • 2.3.8. Phương pháp điện di
    • 2.3.9. Xác định nồng độ DNA bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ
    • 2.3.10. Tinh sạch sản phẩm PCR
    • 2.3.11. Thiết kế mồi đặc hiệu cho phản ứng MS-PCR
    • 2.3.12. Xác định số bản copy
    • 2.3.13. Xử lý kết quả bằng thống kê sinh học
  • 2.4. Sơ đồ thí nghiệm.
• CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.
  • 3.1. Thu thập và phân loại mẫu
  • 3.2. Tách chiết DNA tổng số
    • 3.2.1. Tách chiết DNA từ mẫu máu và dòng tế bào nuôi cấy PC3
    • 3.2.2. Tách chiết DNA từ mẫu bệnh phẩm đúc paraffin
  • 3.3. Xử lý DNA tổng số với bisulfite
    • 3.3.1. Xây dựng phương pháp đánh giá chất lượng DNA sau xử lý bisulfite
    • 3.3.2. Xử lý DNA tổng số của các mẫu bệnh phẩm với bisulfite
  • 3.4. Tối ưu phản ứng MS-PCR để phát hiện methyl hóa promoter gen GSTP1
  • 3.5. Kiểm tra sản phẩm MS-PCR đặc hiệu cho GSTPI bị methyl hóa
    • 3.5.1. Kiểm tra sản phẩm đặc hiệu bằng phản ứng cắt với enzym giới hạn.
    • 3.5.2. Kiểm tra sản phẩm MS-PCR đặc hiệu bằng giải trình tự
  • 3.6. Xác định methyl hóa promoter gen GSTP1 ở các mẫu bệnh phẩm ung thư tuyến tiền liệt và quá sản lành tính
  • 3.7. Xác định ngưỡng phát hiện methyl hóa promoter gen GSTP1 của phản ứng MS-PCR.
  • 3.8. Phân tích tình trạng methyl hóa của promoter gen GSTP1 và các đặc điểm lâm sàng.
  • 3.9. Xây dựng qui trình lai điểm (dot blot) để tăng độ nhạy và độ chính xác phát hiện sản phẩm GSTP1 bị methyl hóa từ phản ứng MS-PCR..
    • 3.9.1 Đánh dấu đầu dò với biotin..
    • 3.9.2. Tối ưu điều kiện lai điểm
    • 3.9.3. Xác định tính đặc hiệu của kỹ thuật lai điểm phân biệt trình tự GSTP1 bị methyl hóa và không methyl hóa
    • 3.9.4. Xác định ngưỡng phát hiện của kỹ thuật lai điểm..
    • 3.9.5. Xác định sản phẩm MS-PCR có GSTP1 bị methyl hóa từ các mẫu ung thư tuyến tiền liệt và mẫu quá sản lành tính
• KẾT LUẬN.
• KIẾN NGHỊ
• DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN.
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
  • Tiếng Việt
  • Tiếng Anh
  • Trang Web